Clara® Inhibitor-Tolerant Probe Mix

Việc khuếch đại đáng tin cậy cho nhiều mục tiêu khác nhau đã được thực hiện thành công với 40 chu trình, trong đó 1 giây cho quá trình khử biến và 3 giây cho quá trình bắt cặp và kéo dài (chu trình 2 bước). Khuếch đại thành công trong các điều kiện này yêu cầu các sản phẩm khuếch đại phải ngắn và nên được kiểm tra theo từng trường hợp đối với tất cả các mục tiêu mới thêm vào một thí nghiệm.

Kết quả sẽ khác nhau tùy thuộc vào loài thực vật và loại mô. Hóa chất chịu được ức chế của chúng tôi cho thấy khả năng kháng vừa phải với clorophyl và polyphenol, chẳng hạn như catechin và quercetin, nhưng kháng yếu với axit tannic, cellulose và pectin. Do đó, việc kiểm tra hỗn hợp trên các loại mẫu mong muốn là điều được khuyến nghị. Tất cả các mô thực vật sẽ yêu cầu phân hủy cơ học trong một đệm chiết xuất thích hợp để đạt được sự phá hủy tế bào và màng, trước khi sử dụng với các hỗn hợp chịu ức chế. Chúng tôi khuyến nghị kiểm tra một số ít phản ứng trên loại mẫu mục tiêu. Vui lòng liên hệ với đội ngũ của chúng tôi qua info@pcrbio.com để yêu cầu mẫu sản phẩm, hoặc nếu bạn cần hỗ trợ trong việc lập kế hoạch các phản ứng thử nghiệm.

Các mẫu nước bọt không cần tiền xử lý. Tuy nhiên, khuyến nghị nên pha loãng trong môi trường vận chuyển mẫu thích hợp. Chúng tôi đặc biệt khuyến nghị sử dụng UTM không chứa guanidinium chloride.

Chúng tôi đã thực hiện thành công các phản ứng đa chiều trên tối đa 5 μL mẫu máu (1.25 μL máu thô pha loãng 1:4 trong dung dịch NaCl/EDTA) cho mỗi phản ứng 20 μL. Điều này dẫn đến việc giảm độ phát quang tổng thể nhưng không ức chế các phản ứng qPCR, cũng như không giới hạn độ nhạy của hỗn hợp.

Chúng tôi đã thử nghiệm thành công tối đa 10% nước bọt thô cho mỗi phản ứng, với kết quả tốt nhất và nhất quán nhất khi sử dụng 2.5% nước bọt

Có. Mặc dù hỗn hợp có khả năng chịu ức chế, nhưng không hoàn toàn kháng lại sự hiện diện của các chất ức chế. Các chất ức chế khác nhau và nồng độ cao hơn vẫn có thể ức chế các phản ứng qPCR. Do độ nhạy của hỗn hợp, nếu có sự chậm trễ đáng kể được quan sát, chúng tôi khuyên bạn nên pha loãng mẫu trước khi sử dụng trong các phản ứng qPCR.

Có, điều này là dự kiến. Các mẫu sinh học thô, đặc biệt là nước bọt, chứa các mức độ khác nhau của chất ức chế PCR. Chúng tôi đã quan sát thấy phạm vi từ 0.5-3.5 chu kỳ chậm trễ trong quá trình khuếch đại của cùng một mục tiêu với các mẫu nước bọt khác nhau. Cùng một mẫu sinh học thô cũng có thể cho thấy các mức độ ức chế khác nhau theo thời gian.

Tất cả các hỗn hợp chịu ức chế của chúng tôi đã được kiểm tra và chịu đựng máu thô và nước bọt thô. Ngoài ra, chúng còn được kiểm tra rộng rãi trong sự hiện diện của nhiều chất ức chế PCR có trong các hóa chất lâm sàng, thực vật, môi trường và trong phòng thí nghiệm. Những chất này bao gồm: hemin, hemoglobin, heparin, lactoferrin, IgG immunoglobulins, guanidine, SDS, ethanol, urea, sodium citrate, humic acid, cellulose, pectin, quercetin, catechin, tannic acid, và chlorophyll B. Mức độ chịu đựng thay đổi theo hợp chất. Các hỗn hợp cũng có thể chịu đựng các hợp chất khác, không được liệt kê hoặc chưa được thử nghiệm.