SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG – Master Mix RT-qPCR một bước tích hợp UNG/dUTP
SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG là hỗn hợp phản ứng RT-qPCR dạng lỏng, nồng độ 2X, được phát triển bởi Jena Bioscience (Đức) để phát hiện và định lượng RNA bằng công nghệ Real-Time PCR sử dụng đầu dò huỳnh quang kép (Dual-Labeled Fluorescent Probes), chẳng hạn như TaqMan®.
Sản phẩm kết hợp quá trình phiên mã ngược (Reverse Transcription) và khuếch đại PCR trong cùng một ống phản ứng, góp phần đơn giản hóa quy trình phân tích và hạn chế các thao tác chuyển mẫu.
Ưu điểm nổi bật
1. Công nghệ One-Step RT-qPCR
Quá trình tổng hợp cDNA từ RNA và khuếch đại Real-Time PCR được thực hiện liên tiếp trong một ống phản ứng, giúp giảm thao tác pipet, tiết kiệm thời gian chuẩn bị và hạn chế nguy cơ nhiễm mẫu.
2. Tích hợp hệ thống UNG/dUTP – Hạn chế nhiễm chéo
Master Mix chứa enzyme Uracil-N-Glycosylase (UNG) và dUTP thay thế dTTP. Hệ thống này giúp xử lý DNA chứa uracil tồn dư từ các phản ứng PCR trước đó, giảm nguy cơ nhiễm carry-over và hạn chế kết quả dương tính giả do loại nhiễm này.
3. Enzyme phiên mã ngược có độ bền nhiệt cao
SCRIPT Reverse Transcriptase được thiết kế để hoạt động hiệu quả ở nhiệt độ phiên mã ngược cao hơn, hỗ trợ tổng hợp cDNA từ RNA có cấu trúc thứ cấp phức tạp.
4. Hot Start Polymerase AB+
Công nghệ Hot Start Polymerase giúp hạn chế khuếch đại không đặc hiệu trong giai đoạn chuẩn bị phản ứng, hỗ trợ nâng cao tính đặc hiệu của RT-qPCR.
5. Tích hợp RNase Inhibitor
Hỗn hợp chứa chất ức chế RNase nhằm bảo vệ RNA khỏi sự phân hủy do RNase nhiễm vào mẫu hoặc phản ứng, đặc biệt hữu ích khi phân tích lượng RNA đầu vào thấp.
6. Hỗ trợ Multiplex RT-qPCR
Sản phẩm phù hợp với phương pháp phát hiện dựa trên đầu dò huỳnh quang kép, hỗ trợ thiết kế phản ứng phát hiện nhiều mục tiêu khi sử dụng các cặp primer, probe và kênh huỳnh quang tương thích.
Ứng dụng
-
Phát hiện và định lượng RNA bằng Real-Time RT-PCR.
-
Nghiên cứu biểu hiện gen ở cấp độ RNA.
-
Phân tích RNA của các tác nhân vi sinh vật trong nghiên cứu.
-
Nghiên cứu RNA virus bằng các bộ primer và probe phù hợp.
-
Phát triển và tối ưu hóa phương pháp One-Step RT-qPCR.
-
Phân tích đa mục tiêu bằng Multiplex RT-qPCR.
Thành phần và quy cách
Hỗn hợp 2X chứa SCRIPT Reverse Transcriptase, Hot Start Polymerase AB+, UNG, RNase Inhibitor, dNTPs (bao gồm dUTP), đệm phản ứng và các chất ổn định. Sản phẩm được cung cấp kèm nước PCR-grade.
Quy cách:
-
PCR-523S: 2 × 1,25 mL – tương đương 250 phản ứng 20 µL.
-
PCR-523L: 10 × 1,25 mL – tương đương 1.250 phản ứng 20 µL.
Điều kiện bảo quản: -20°C, tránh đông – rã đông nhiều lần.
Lưu ý: Sản phẩm dùng cho mục đích phòng thí nghiệm thông thường; không mặc định sử dụng cho chẩn đoán lâm sàng.
Liên hệ tư vấn & đặt hàng: 0908.090.555
Công ty TNHH Khoa học Kỹ thuật Toàn Cầu
Website: www.GlobalLAB.com.vn
Tài liệu ứng dụng và thông tin nghiên cứu
RNA Amplification: Keep control! – Jena Bioscience
Bài viết kỹ thuật của Jena Bioscience giới thiệu các giải pháp khuếch đại RNA, trong đó có SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG.
Nhà sản xuất trình bày dữ liệu ứng dụng về phát hiện các mục tiêu RNA bằng RT-qPCR, bao gồm ví dụ nghiên cứu các gen RdRP và E của SARS-CoV-2.
Nguồn: https://www.jenabioscience.com/news-infos/news-blog/3450-rna-amplification-keep-control
Lưu ý: Đây là tài liệu ứng dụng do nhà sản xuất công bố, không phải bài báo khoa học bình duyệt. Các ứng dụng nghiên cứu được trình bày không đồng nghĩa với việc sản phẩm được cấp phép chẩn đoán.
Tài liệu kỹ thuật – SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG
1. Datasheet – SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG
Tài liệu thông số kỹ thuật chính thức của Jena Bioscience, bao gồm thành phần Master Mix, quy cách đóng gói, hướng dẫn pha phản ứng, chương trình nhiệt, bảo quản và các lưu ý sử dụng.
Phiên bản: 0004 – Cập nhật ngày 20/06/2024.
PDF: https://www.jenabioscience.com/images/PDF/PCR-523.0004.pdf
2. Brochure – Reverse Transcription Real-Time PCR
Tài liệu tổng quan các dòng hóa chất RT-qPCR của Jena Bioscience, công nghệ phiên mã ngược và lựa chọn Master Mix phù hợp.
PDF: https://www.jenabioscience.com/images/dcf5572fa4/JBS-broschure-ReverseTranscriptionPCR.pdf
3. Trang thông tin sản phẩm của nhà sản xuất
Nguyên lý và hướng dẫn sử dụng SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG
1. Nguyên lý hoạt động
SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG sử dụng công nghệ One-Step RT-qPCR kết hợp đầu dò huỳnh quang kép.
Quá trình phản ứng gồm hai giai đoạn chính:
Phiên mã ngược (Reverse Transcription): SCRIPT Reverse Transcriptase tổng hợp cDNA từ RNA khuôn.
Khuếch đại và phát hiện: Hot Start Taq Polymerase khuếch đại trình tự DNA đích. Tín hiệu huỳnh quang từ probe được thiết bị Real-Time PCR ghi nhận qua các chu kỳ, hỗ trợ phân tích lượng RNA ban đầu.
Cơ chế UNG/dUTP
Hệ thống chứa dUTP và enzyme UNG để giảm nguy cơ nhiễm DNA từ các phản ứng PCR trước.
UNG nhận biết và loại bỏ uracil trong DNA chứa dU, khiến những phân tử DNA này không còn là khuôn khuếch đại hiệu quả.
Cơ chế này chủ yếu kiểm soát nhiễm carry-over từ sản phẩm PCR chứa uracil, không thay thế các biện pháp kiểm soát nhiễm và mẫu đối chứng của phòng thí nghiệm.
2. Chuẩn bị phản ứng RT-qPCR
Công thức tham khảo cho phản ứng 20 µL:
| Thành phần | Thể tích |
|---|---|
| SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG (2X) | 10 µL |
| Forward Primer (10 µM) | 0,8 µL |
| Reverse Primer (10 µM) | 0,8 µL |
| Dual-Labeled Probe (10 µM) | 0,4 µL |
| RNA mẫu | x µL |
| PCR-grade Water | Bổ sung đủ 20 µL |
Nồng độ cuối của các primer là 400 nM mỗi loại và probe là 200 nM.
Theo công thức hướng dẫn, lượng RNA đầu vào tối đa là 100 ng/phản ứng. Các nồng độ primer và probe cần được tối ưu tùy theo từng phương pháp thử.
3. Chương trình nhiệt tham khảo
| Giai đoạn | Nhiệt độ | Thời gian | Số chu kỳ |
|---|---|---|---|
| Phiên mã ngược | 50–55°C | 20–30 phút | 1 |
| Biến tính ban đầu | 95°C | 5 phút | 1 |
| Biến tính | 95°C | 15 giây | 35–45 |
| Bắt cặp và kéo dài | 60–65°C | 40–60 giây | 35–45 |
Đối với đoạn đích 100–200 bp, nhà sản xuất khuyến nghị thời gian phiên mã ngược khoảng 20 phút. Đoạn dài hơn hoặc RNA có cấu trúc thứ cấp phức tạp có thể yêu cầu điều chỉnh điều kiện phản ứng.
4. Những lưu ý quan trọng
-
Tránh nhiễm RNase trong quá trình chuẩn bị và thao tác với RNA.
-
Không cần bổ sung RNase Inhibitor nếu sử dụng đúng công thức Master Mix tiêu chuẩn đã tích hợp thành phần này.
-
Primer, probe và RNA mẫu phải được bổ sung riêng.
-
Có thể bổ sung ROX Reference Dye nếu thiết bị Real-Time PCR yêu cầu.
-
Các thông số nhiệt và thành phần phản ứng cần được thẩm định hoặc tối ưu theo từng mục tiêu phân tích.
Sử dụng theo hướng dẫn kỹ thuật chính thức của Jena Bioscience.
Hóa chất và vật tư sử dụng kèm
1. ROX Reference Dye – Jena Bioscience
-
Mã sản phẩm: PCR-351-1ML / PCR-351-10ML.
-
Nồng độ: 25 µM.
-
Chức năng: Thuốc nhuộm tham chiếu hỗ trợ chuẩn hóa tín hiệu huỳnh quang trên các thiết bị Real-Time PCR tương thích.
-
Sử dụng bổ sung khi thiết bị hoặc phương pháp phân tích yêu cầu.
-
Cung cấp riêng, không nằm trong bộ SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG tiêu chuẩn.
2. Dual-Labeled Fluorescent Probes
Các đầu dò huỳnh quang kép tương thích với phương pháp phát hiện và thiết bị Real-Time PCR sử dụng.
3. PCR Primers
Cặp primer đặc hiệu cho trình tự RNA mục tiêu. Thiết kế và lựa chọn tùy theo ứng dụng.
4. Vật tư tiêu hao Real-Time PCR
Ống hoặc đĩa PCR quang học, nắp hoặc màng dán tương thích với thiết bị.
Lưu ý: Primer, probe, thuốc nhuộm ROX và vật tư tiêu hao là những thành phần cần chuẩn bị hoặc mua bổ sung tùy phương pháp. PCR-grade Water đã được liệt kê trong thành phần cung cấp của sản phẩm.
Thông số kỹ thuật SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG
| Thông số | Thông tin |
|---|---|
| Tên sản phẩm | SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG |
| Hãng sản xuất | Jena Bioscience GmbH |
| Quốc gia của hãng | Đức |
| Mã sản phẩm | PCR-523S / PCR-523L |
| Công nghệ | One-Step RT-qPCR |
| Phương pháp phát hiện | Dual-Labeled Fluorescent Probes |
| Dạng sản phẩm | Dung dịch lỏng |
| Nồng độ Master Mix | 2X |
| Nồng độ sử dụng cuối | 1X |
| Enzyme phiên mã ngược | SCRIPT Reverse Transcriptase |
| DNA Polymerase | Hot Start Polymerase AB+ |
| Hệ kiểm soát nhiễm carry-over | UNG/dUTP |
| Thành phần bảo vệ RNA | RNase Inhibitor |
| Thành phần nucleotide | dNTPs có dUTP |
| Dung tích phản ứng tham khảo | 20 µL hoặc 50 µL |
| Nhiệt độ phiên mã ngược | 50–55°C |
| Phương pháp định lượng | Real-Time PCR |
| Multiplex RT-qPCR | Hỗ trợ với bộ probe và thiết bị phù hợp |
| ROX Reference Dye | Có thể bổ sung riêng |
| Điều kiện vận chuyển | Gel packs |
| Nhiệt độ bảo quản | -20°C |
| Lưu ý bảo quản | Tránh lặp lại đông – rã đông |
| Hạn sử dụng công bố | 12 tháng |
| Mục đích | Sử dụng trong phòng thí nghiệm thông thường |
Quy cách đóng gói
| Mã sản phẩm | Dung tích Master Mix | Số phản ứng 20 µL |
|---|---|---|
| PCR-523S | 2 × 1,25 mL | 250 |
| PCR-523L | 10 × 1,25 mL | 1.250 |
Khả năng phát hiện RNA tham khảo
Theo datasheet, sản phẩm có thể phát hiện mục tiêu với khoảng lượng RNA đầu vào tham khảo:
-
Poly(A) RNA (mRNA): dưới 1 pg đến 20 ng.
-
Total RNA: 10 pg đến 1 µg.
Đây là khoảng khả năng phát hiện được nhà sản xuất công bố, không phải giới hạn phát hiện (LOD) cố định cho mọi mục tiêu. Công thức pha phản ứng tiêu chuẩn trên trang hãng sử dụng tối đa 100 ng RNA; cần lựa chọn lượng mẫu thích hợp và thẩm định hiệu năng cho từng assay.
1. SCRIPT RT-qPCR ProbesMaster UNG là gì?
Đây là Master Mix 2X sử dụng trong kỹ thuật One-Step RT-qPCR, cho phép phiên mã ngược RNA thành cDNA và khuếch đại, phát hiện sản phẩm bằng đầu dò huỳnh quang kép trong cùng một ống phản ứng.
2. Hệ thống UNG/dUTP có tác dụng gì?
Hệ UNG/dUTP giúp giảm nguy cơ nhiễm DNA từ các phản ứng PCR trước đó. UNG xử lý DNA chứa uracil, hạn chế DNA này trở thành khuôn khuếch đại trong phản ứng tiếp theo.
3. Master Mix đã chứa primer và probe chưa?
Chưa. Sản phẩm đã chứa các enzyme và thành phần phản ứng chính. Người sử dụng cần bổ sung RNA mẫu, primer và probe thích hợp.
4. Sản phẩm có sử dụng cho Multiplex RT-qPCR được không?
Có. Phương pháp phát hiện bằng đầu dò huỳnh quang kép hỗ trợ Multiplex RT-qPCR. Khả năng thực hiện phụ thuộc vào bộ primer/probe, kênh huỳnh quang của thiết bị và điều kiện phản ứng được tối ưu.
5. Có cần bổ sung ROX Reference Dye không?
Tùy thiết bị Real-Time PCR. Nếu máy yêu cầu sử dụng tín hiệu tham chiếu ROX, có thể bổ sung ROX Reference Dye tương thích. ROX không được liệt kê trong thành phần của bộ PCR-523 tiêu chuẩn.
6. Sản phẩm cần bảo quản như thế nào?
Bảo quản ở -20°C và tránh các chu kỳ đông – rã đông lặp lại. Khi vận chuyển, nhà sản xuất sử dụng gel packs.
7. Sản phẩm có dùng để phát hiện RNA virus không?
Sản phẩm có thể được sử dụng để phát triển các phương pháp phát hiện RNA virus bằng RT-qPCR với bộ primer và probe phù hợp. Phương pháp cụ thể cần được thẩm định theo mục đích sử dụng.
8. Sản phẩm có sử dụng được trong chẩn đoán lâm sàng không?
Nhà sản xuất ghi mục đích sử dụng là phòng thí nghiệm thông thường. Không nên quảng cáo sản phẩm là sinh phẩm chẩn đoán lâm sàng nếu chưa có hồ sơ pháp lý và chứng nhận phù hợp cho ứng dụng đó.
Xem thêm