| Số CAT | Sản phẩm | Kích thước | Giá |
|---|---|---|---|
| PB25.41-01 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.41-03 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 300 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.41-05 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 500 x 20 μL Reactions (1 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.41-12 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 1200 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.41-50 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 5000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.42-01 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.42-03 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 300 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.42-05 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 500 x 20 μL Reactions (1 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.42-12 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 1200 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.42-50 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 5000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.43-01 | qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.43-03 | qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 300 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.43-05 | qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 500 x 20 μL Reactions (1 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.43-12 | qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 1200 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.43-50 | qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 5000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.44-01 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Separate-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.44-03 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Separate-ROX | 300 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.44-05 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Separate-ROX | 500 x 20 μL Reactions (1 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB25.44-12 | qPCRBIO Probe 1-Step Go Separate-ROX | 1200 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
Để xem giá của bạn, vui lòng đăng nhập hoặc đăng ký với tham chiếu báo giá của bạn.
Thông tin bổ sung
qPCRBIO Probe 1-Step Go là bộ kit đầu dò đa năng được thiết kế cho RT-PCR thời gian thực dựa trên đầu dò nhanh, rất đặc hiệu và nhạy. Chúng tôi sử dụng các phát triển mới nhất trong công nghệ men sao chép ngược và hóa chất đệm để cung cấp quá trình tổng hợp cDNA hiệu quả và PCR thời gian thực trong một ống duy nhất.
qPCRBIO Probe 1-Step Go được thiết kế để sử dụng trên nhiều công nghệ đầu dò bao gồm TaqMan®, Scorpions® và đầu dò beacon phân tử. Bộ kit bao gồm một hỗn hợp 2x và có thể được sử dụng để định lượng bất kỳ mẫu RNA nào bao gồm mRNA, RNA tổng hợp và các chuỗi RNA virus. qPCRBIO Probe 1-Step Go được thiết kế để cung cấp kết quả nhanh chóng và chính xác trên một dải nồng độ mẫu rộng và rất phù hợp cho việc phát hiện virus RNA bao gồm SARS-CoV-2.
Bộ kit bao gồm một men sao chép ngược MMLV đã được sửa đổi có khả năng ổn định nhiệt độ và hoạt động cực kỳ mạnh mẽ (RTase Go) và chất ức chế RNase tiên tiến ngăn ngừa sự phân hủy RNA bởi RNase ô nhiễm. Công nghệ khởi động nóng bằng kháng thể ngăn chặn sự hình thành dimers mồi và các sản phẩm không đặc hiệu, mang lại RT-PCR thời gian thực rất đặc hiệu và siêu nhạy với hiệu suất vô song trong nhiều phản ứng cùng lúc. Kết hợp các phát triển mới nhất trong công nghệ polymerase và hóa chất đệm tiên tiến, chúng tôi cung cấp hiệu suất hàng đầu thị trường với ít hoặc không cần tối ưu hóa.
Ứng dụng
- Xét nghiệm và nghiên cứu COVID-19 / SARS-CoV-2
- RT-PCR chẩn đoán thời gian thực
- Định lượng đa hoặc đơn
- Phát hiện các mục tiêu số lượng thấp
- Định lượng tuyệt đối
- Phân tích biểu hiện gen tương đối
- Đầu dò TaqMan®, Scorpions® và đầu dò beacon phân tử
Thông số kỹ thuật
qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX
| Thành phần | 100 phản ứng | 300 Phản ứng | 500 Phản ứng | 1200 Phản ứng | 5000 Phản ứng | 50000 Phản ứng |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 2x qPCRBIO Probe 1-Step Go Lo-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 1 x 5 mL | 12 x 1 mL | 1 x 50 mL | 1 x 500 mL |
| 20x RTase Go with RNase Inhibitor | 1 x 100 μL | 3 x 100 μL | 1 x 500 μL | 12 x 100 μL | 1 x 5 mL | 1 x 50 mL |
qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX
| Thành phần | 100 phản ứng | 300 Phản ứng | 500 Phản ứng | 1200 Phản ứng | 5000 Phản ứng | 50000 Phản ứng |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 2x qPCRBIO Probe 1-Step Go Hi-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 1 x 5 mL | 12 x 1 mL | 1 x 50 mL | 1 x 500 mL |
| 20x RTase Go with RNase Inhibitor | 1 x 100 μL | 3 x 100 μL | 1 x 500 μL | 12 x 100 μL | 1 x 5 mL | 1 x 50 mL |
qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX
| Thành phần | 100 phản ứng | 300 Phản ứng | 500 Phản ứng | 1200 Phản ứng | 5000 Phản ứng | 50000 Phản ứng |
|---|---|---|---|---|---|---|
| 2x qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 1 x 5 mL | 12 x 1 mL | 1 x 50 mL | 1 x 500 mL |
| 20x RTase Go with RNase Inhibitor | 1 x 100 μL | 3 x 100 μL | 1 x 500 μL | 12 x 100 μL | 1 x 5 mL | 1 x 50 mL |
qPCRBIO Probe 1-Step Go Separate-ROX
| Thành phần | 100 phản ứng | 300 Phản ứng | 500 Phản ứng | 1200 Phản ứng | ||
|---|---|---|---|---|---|---|
| 2x qPCRBIO Probe 1-Step Go No-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 1 x 5 mL | 12 x 1 mL | ||
| 20x RTase Go with RNase Inhibitor | 1 x 100 μL | 1 x 300 μL | 1 x 500 μL | 4 x 300 μL | ||
| 50μM ROX Additive | 1 x 200 μL | 1 x 200 μL | 1 x 200 μL | 4 x 200 μL |
Thông tin về phản ứng
| Thể tích phản ứng | Lưu trữ | |||
|---|---|---|---|---|
| 20μL |
Khi nhận hàng, sản phẩm nên được bảo quản giữa -30 và -20 °C. Nếu được lưu trữ đúng cách, bộ sản phẩm sẽ giữ hoạt tính đầy đủ đến ngày hết hạn đã chỉ định. |
Tương thích với thiết bị
Sản phẩm này tương thích với tất cả các thiết bị qPCR tiêu chuẩn và nhanh. Sử dụng Công cụ Chọn lọc qPCR của chúng tôi để tìm ra biến thể ROX nào tương thích với thiết bị của bạn.
Tài liệu
Tờ rơi sản phẩm
Hướng dẫn sử dụng
Câu hỏi thường gặp (FAQs)
Giá trị Ct nào thì kết quả không đáng tin cậy?
Giá trị Ct có thể thay đổi tùy thuộc vào nồng độ mẫu, tối ưu hóa phản ứng, thiết bị và phòng thí nghiệm, vì vậy cần thận trọng khi chọn một giá trị Ct cắt hỗ trợ. Thông thường, giá trị Ct trên 35 sẽ được coi là không đáng tin cậy. Tuy nhiên, giá trị Ct muộn có thể được quan sát đối với các phản ứng không hiệu quả khi sử dụng số lượng mẫu thấp. Luôn luôn là thực tiễn tốt để chuẩn hóa giá trị cắt với các phương pháp định lượng tương đối hoặc tuyệt đối. Cũng nên chạy và phân tích các đường cong nóng chảy hoặc gel của các sản phẩm để xác định các sản phẩm từ bất kỳ sự khuếch đại muộn nào.
Có thể sử dụng qPCRBIO Probe 1-Step Go cho cả phản ứng RT-PCR một bước và hai bước không?
Không, bộ kít này sẽ không hoạt động cho các phản ứng hai bước. Đối với các phản ứng hai bước, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Bộ kít Tổng hợp cDNA UltraScript® (PB30.11) hoặc Bộ kít Tổng hợp cDNA UltraScript® 2.0 (PB30.31) cho các mục tiêu khó hơn, cùng với các bộ kít PCR thời gian thực tùy thuộc vào nhu cầu của bạn.
ROX có ảnh hưởng tiêu cực đến phản ứng không?
ROX (6-carboxy-X-rhodamine) được sử dụng như một phẩm màu tham khảo thụ động trong các thiết bị PCR thời gian thực phụ thuộc vào ROX để chuẩn hóa cho các biến động của mức độ phát quang có thể phát sinh chủ yếu do sự biến đổi quang học giữa các giếng. Việc chuẩn hóa cường độ phát quang (Rn) được thực hiện trong phần mềm PCR thời gian thực bằng cách chia cường độ phát thải của tín hiệu cụ thể cho cường độ phát thải của ROX.
ROX không tham gia vào phản ứng PCR và mức độ phát quang của nó không tỉ lệ thuận với số lượng DNA trong mỗi giếng, do đó, việc thêm fluorophore này vào hỗn hợp cung cấp một tín hiệu phát quang không đổi trong quá trình khuếch đại.
Các loại thiết bị PCR thời gian thực khác nhau yêu cầu một tiêu chuẩn tham khảo thụ động có những nồng độ tối ưu khác nhau của ROX, chủ yếu do các cấu hình quang học khác nhau của từng hệ thống (tức là loại nguồn kích thích và quang học khác nhau được sử dụng).
Việc thêm quá ít hoặc quá nhiều ROX sẽ dẫn đến một tín hiệu rất ồn ảnh hưởng đến kết quả của phản ứng. Do đó, điều rất quan trọng là người dùng phải:
- Xác định nồng độ ROX chính xác để tối ưu hóa kết quả PCR thời gian thực, và
- Kiểm tra cài đặt ROX trên phần mềm được sử dụng để thiết lập phản ứng
Một công cụ lựa chọn hữu ích cho các hệ thống được sử dụng phổ biến nhất có thể được tìm thấy tại đây.
Thời gian kích hoạt cho polymerase HS Taq DNA có thể thay đổi không?
Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng ít nhất 2 phút để kích hoạt polymerase. Thời gian lâu hơn lên đến 15 phút cũng có thể được sử dụng mà không có tác động tiêu cực nào đến enzyme.
Tôi cần phản ứng một bước hay hai bước?
Một bước
Cả tổng hợp cDNA và phản ứng PCR diễn ra trong cùng một hỗn hợp. Tùy chọn này phù hợp cho các ứng dụng có throughput cao nhờ vào tốc độ và sự dễ dàng trong thiết lập. Cũng có nguy cơ nhiễm bẩn được giảm. Nó không lý tưởng cho các mẫu RNA chất lượng thấp hoặc nếu cDNA được yêu cầu để lưu trữ hoặc phân tích riêng biệt.
Hai bước
Tổng hợp cDNA và phản ứng PCR diễn ra riêng biệt. Tùy chọn này phù hợp hơn nếu sản phẩm cDNA cần được giữ lại để phân tích. Nó cũng cho phép mức độ tối ưu hóa phản ứng cao hơn. Nó cho phép kiểm soát loại và nồng độ enzyme, đầu vào RNA và nồng độ cDNA, điều này dẫn đến độ nhạy cao hơn so với định dạng một bước.
Tôi có cần sử dụng một chất ức chế RNase trong phản ứng RT của mình không?
Không, RTase Go chứa một chất ức chế RNase để ngăn chặn bất kỳ sự phân hủy nào và tăng độ nhạy.
Khắc phục sự cố chung cho sản phẩm thấp / giá trị Ct muộn.
Nếu bạn quan sát thấy các giá trị Ct muộn bất thường, hãy thử pha loãng RNA mẫu. Bằng cách này, bạn đang pha loãng bất kỳ chất ức chế nào có thể tồn tại đến một nồng độ mà chúng không ức chế được phản ứng. Ngoài ra, hãy thử tăng bước phiên mã ngược lên 55 °C và tăng nhiệt độ gắn / kéo dài. Điều này có thể giúp giải quyết những khó khăn gây ra bởi các cấu trúc thứ cấp có trong mẫu RNA và / hoặc mồi.
Trong những trường hợp mà có thể có sự ức chế phản ứng, hãy thử giảm lượng mẫu1 hoặc thêm 0.4 – 4.4 mg/ml BSA vào phản ứng2.
Đối với các vấn đề cụ thể hơn, hãy liên hệ technical@pcrbio.com với thông tin sau:
- Kích thước amplicon
- Cài đặt phản ứng
- Điều kiện chu trình
- Chụp màn hình các dấu vết khuếch đại và hồ sơ nóng chảy
1 Scipioni et al. A SYBR Green RT-PCR assay in single tube to detect human and bovine noroviruses and control for inhibition. Virology Journal.5:94 (2008). doi: 1186/1743-422X-5-94
2 Plante et al. The use of bovine serum albumin to improve the RT‐qPCR detection of foodborne viruses rinsed from vegetable surfaces. Applied Microbiology. 52:3 (2010) doi: https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2010.02989.x
Có bình thường không nếu độ phát quang của qPCRBIO Probe Mixes khác với sản phẩm của các đối thủ?
Các sản phẩm khác nhau có thể cho một plateau phát quang khác nhau. Tuy nhiên, điều này không ảnh hưởng đến độ chính xác định lượng và các giá trị Ct sẽ không khác nhau giữa các sản phẩm.
Có cần phải tách mRNA cho RT-PCR nhạy cảm không?
Việc tách mRNA thường không cần thiết. Bộ kít qPCRBIO Probe 1-Step Go đã được phát triển để làm việc trên các mẫu có chứa chỉ 1 pg RNA tổng hoặc 0.01 pg mRNA.
Nếu bạn đang làm việc với các loài mRNA hiếm, hãy sử dụng một mồi cụ thể cho trình tự trong phản ứng RT để tăng cường độ nhạy.
Sự khác biệt giữa các hỗn hợp dựa trên mồi và thuốc nhuộm là gì?
Các bộ kít dựa trên mồi như qPCRBIO Probe 1-Step Go cung cấp độ nhạy cao hơn và ít có khả năng cho thấy các khuếch đại không phải mẫu. Các multiplex có thể được đo bằng cách sử dụng các amplicon với các fluorophore khác nhau cho các mồi cụ thể, điều này không thể đạt được bằng cách sử dụng thuốc nhuộm.
Các hệ thống dựa trên thuốc nhuộm như qPCRBIO SyGreen 1-Step Detect | 1-Step Go phát hiện bất kỳ dsDNA nguyên vẹn nào và do đó sẽ cho thấy dimers mồi và các khuếch đại ngoài mục tiêu / không phải mẫu. Những điều này có thể được tách ra khỏi các đỉnh sản phẩm bằng cách phân tích các đường cong nóng chảy.
ROX là gì và tôi có cần nó không?
ROX là một phẩm màu tham khảo thụ động có nghĩa là nó không tham gia vào phản ứng PCR. Nó được sử dụng để chuẩn hóa các biến động không liên quan đến PCR trong phát quang. Bạn có thể sử dụng Công cụ Lựa chọn qPCR của chúng tôi trong menu thả xuống Tài nguyên để xác định bộ qPCR nào của chúng tôi phù hợp nhất cho máy qPCR của bạn.
Nồng độ MgCl2 trong các hỗn hợp qPCRBIO Probe 1-Step Go là bao nhiêu?
Tất cả các hỗn hợp qPCRBIO Probe 1-Step Go đều chứa MgCl2 với nồng độ 9 mM. Điều này có nghĩa là nồng độ cuối cùng trong phản ứng là 4.5 mM.
Tôi có thể sử dụng phương pháp mồi nào?
Các mồi cụ thể cho gen có thể được sử dụng trong phản ứng một bước.
Những điều gì cần xem xét khi thực hiện khuếch đại multiplex?
Các mồi nên được thiết kế để đảm bảo rằng chúng có nhiệt độ gắn tương tự, cụ thể với mục tiêu, và không hình thành dimers mồi. Nồng độ mồi / mồi không nên yêu cầu điều chỉnh trừ khi các mức biểu hiện khác nhau một cách đáng kể. Đối với các mục tiêu có mức biểu hiện cao, lượng mồi nên được giảm, và đối với các mục tiêu có mức biểu hiện thấp hơn, nó nên được tăng lên.
Sự khác biệt giữa bộ kít PCRBIO 1-Step Go RT-PCR, qPCRBIO Probe 1-Step Go và qPCRBIO SyGreen 1-Step Detect|Go là gì?
Bộ kít PCRBIO 1-step Go RT-PCR đã được phát triển cho PCR RT đến đích. qPCRBIO Probe 1-Step Go và qPCRBIO SyGreen 1-Step Detect|Go là các lựa chọn dựa trên mồi và thuốc nhuộm của chúng tôi cho RT-PCR thời gian thực, tương ứng.
Khi thực hiện một multiplex, nồng độ khuyến nghị của mỗi mồi là bao nhiêu?
Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng 0.4 µM cho mỗi mồi. Có một mức độ linh hoạt xung quanh nồng độ khuyến nghị này, tuy nhiên, nồng độ mồi không nên được tăng lên, vì điều này có thể ảnh hưởng đáng kể đến hoạt động của enzyme.
Điều này có hoạt động cho các mẫu micro RNA không?
Có, qPCRBIO Probe 1-Step Go có thể được sử dụng cho các mẫu micro RNA. Mặc dù chúng tôi không bán các bộ kít chuyên dụng, tất cả các RTase của chúng tôi có thể được sử dụng cho định lượng và phân tích miRNA.
Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng một trong hai cách tiếp cận sau:
- Sử dụng các mồi RT phổ quát và thêm đuôi poly(A) hoặc poly(U) (ví dụ: bằng polymerase poly(U)), tiếp theo là tổng hợp cDNA bằng cách sử dụng các mồi phổ quát1,2.
- Sử dụng các mồi RT cụ thể và bỏ qua bước đuôi1,3-5.
Nếu bạn không quen với các chi tiết của những cách tiếp cận đó, vui lòng tham khảo danh sách tài liệu bên dưới, nó sẽ là hướng dẫn.
1 Dave, V. P. et al. MicroRNA amplification and detection technologies: opportunities and challenges for point of care diagnostics. Lab Invest 99, 452-469, doi:10.1038/s41374-018-0143-3 (2019).
2 Mei, Q. et al. A facile and specific assay for quantifying microRNA by an optimized RT-qPCR approach. PLoS One 7, e46890, doi:10.1371/journal.pone.0046890 (2012).
3 Chen, C. et al. Real-time quantification of microRNAs by stem-loop RT-PCR. Nucleic Acids Res 33, e179, doi:10.1093/nar/gni178 (2005).
4 Raymond, C. K., Roberts, B. S., Garrett-Engele, P., Lim, L. P. & Johnson, J. M. Simple, quantitative primer-extension PCR assay for direct monitoring of microRNAs and short-interfering RNAs. RNA 11, 1737-1744, doi:10.1261/rna.2148705 (2005).
5 Androvic, P., Valihrach, L., Elling, J., Sjoback, R. & Kubista, M. Two-tailed RT-qPCR: a novel method for highly accurate miRNA quantification. Nucleic Acids Res 45, e144, doi:10.1093/nar/gkx588 (2017).
Xem thêm