| Mã CAT | Sản phẩm | Kích thước | Giá |
|---|---|---|---|
| PB25.85-01 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX | 200 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.85-03 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX | 600 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.85-05 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX | 1000 x 20 μL Reactions (5 x 1 mL) | Contact us |
| PB25.85-50 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX | 10 000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Contact us |
| PB25.86-01 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX | 200 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.86-03 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX | 600 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.86-05 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX | 1000 x 20 μL Reactions (5 x 1 mL) | Contact us |
| PB25.86-50 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX | 10 000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Contact us |
| PB25.87-01 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 200 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.87-03 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 600 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.87-05 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 1000 x 20 μL Reactions (5 x 1 mL) | Contact us |
| PB25.87-50 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 10 000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Contact us |
| PB25.88-01 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Separate-ROX | 200 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.88-03 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Separate-ROX | 600 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB25.88-05 | Clara® Probe 1-Step Purple Mix Separate-ROX | 1000 x 20 μL Reactions (5 x 1 mL) | Contact us |
Để xem giá của bạn, vui lòng đăng nhập hoặc đăng ký với tham chiếu báo giá của bạn.
Thông Tin Thêm
Hỗn hợp qPCR 1-bước Probe – Kết quả rõ ràng, Kết luận đáng tin cậy
Hỗn hợp Clara® Probe 1-Step Purple cho phép qPCR và 1-bước RT-qPCR với độ nhạy, độ tin cậy cao và dễ sử dụng nhất trong các ứng dụng chẩn đoán và nghiên cứu cơ bản. Nó là một loại hỗn hợp qPCR phổ quát phù hợp cho tất cả các loại công nghệ probe, bao gồm TaqMan, Scorpions và nhãn phân tử. Đây là thế hệ đầu tiên của các hỗn hợp RT-qPCR 1-bước tất cả trong một, nơi cả ADN polymerase và reverse transcriptase đều được bao gồm trong cùng một mastermix. Hỗn hợp Clara® Probe 1-Step Purple được hỗ trợ bởi ADN polymerase Taq hot start độc quyền của chúng tôi và một phiên bản được chỉnh sửa đặc biệt của UltraScript® Reverse Transcriptase hiệu suất cao, ổn định nhiệt. Việc thử nghiệm nghiêm ngặt trong quá trình phát triển đã làm cho hỗn hợp này rất phù hợp cho cả phát hiện đơn lẻ và đa mục tiêu với độ hiệu quả cao và độ nhạy phát hiện, cho dù bạn đang phát hiện một mục tiêu hay nhiều mục tiêu đồng thời.
Hỗn hợp cũng phù hợp cho phân tích đường chuyển nhiệt (chỉ với probe lai) và có sẵn mà không có thuốc nhuộm tham chiếu thụ động (No-ROX), hoặc với thuốc nhuộm tham chiếu dưới dạng Lo-ROX, Hi-ROX và các chế phẩm riêng biệt-ROX. Sử dụng Công cụ Lựa Chọn qPCR của chúng tôi để tìm hiểu biến thể ROX nào tương thích với thiết bị của bạn.
Thuốc nhuộm tím dễ nhìn
Hỗn hợp Clara® Probe 1-Step Purple kết hợp tốc độ, độ nhạy và độ đặc hiệu của gia đình thuốc thử Clara® với một thuốc nhuộm tím trơ để dễ dàng quan sát mẫu. Thuốc nhuộm đã giảm thiểu đáng kể hiệu ứng làm mờ của các fluorophore probe, để đảm bảo kết quả qPCR chính xác, đồng thời giảm thiểu việc xử lý và pipetting.
Sự giảm độ tươi sáng của probe trong các Hỗn hợp Clara® Probe 1-Step Purple:
FAM: tối đa 25%
HEX: tối đa 30%
Tex: tối đa 25%
Cy5: tối đa 10%
Các tỷ lệ phần trăm đại diện cho sự giảm chiều cao b plateau (Hỗn hợp tím so với hỗn hợp cơ bản) trong ít nhất hai phản ứng khác nhau.
Đem lại sự dễ dàng tối đa
Cấu trúc đệm độc quyền của chúng tôi (được xác định qua công nghệ sàng lọc thông minh) và UltraScript® RTase được chỉnh sửa độc đáo cho phép hỗn hợp được lưu trữ trong một ống, như một mastermix RT-qPCR tất cả trong một. Điều này giảm thiểu lượng pipetting cần thiết cho việc thiết lập thí nghiệm, giảm thiểu rủi ro nhiễm bẩn, và tiết kiệm thời gian. Nó cũng có nghĩa là một thuốc thử phù hợp cho việc khuếch đại ADN và ARN, và cả hai loại mục tiêu có thể được bao gồm trên cùng một đĩa hoặc trong cùng một lần chạy. Việc có một hỗn hợp có nghĩa là bạn không cần thiết lập khác khi điều tra chủ yếu các mục tiêu ARN, nhưng vẫn cần định lượng ADN.
Mặc dù những người dùng thử nghiệm một lượng lớn cả hai loại mục tiêu có thể thích các thuốc thử chuyên dụng cho mỗi loại mục tiêu, Hỗn hợp Clara® Probe Purple được phát triển riêng cho việc phát hiện dựa trên probe ADN và cDNA.
Cải thiện độ tin cậy của PCR thời gian thực
Việc tối ưu hóa rộng rãi làm cho hỗn hợp này phù hợp cho tất cả các loại mục tiêu axit nucleic. Chúng tôi đã thử nghiệm nó với các virus ARN phổ biến, bao gồm SARS-CoV-2, RSV, Influenza A và B, các gen housekeeping tiêu chuẩn, như g-actin và GAPDH, cũng như các mục tiêu ADN. Sự hiện diện của RTase trong hỗn hợp không ảnh hưởng đến việc khuếch đại trực tiếp các mục tiêu ADN, có nghĩa là bạn có được cùng độ hiệu quả cao cho dù bạn đang phát hiện các chuỗi ADN hay ARN. Hỗn hợp này rất ổn định và cho thấy sự tái lập mạnh mẽ giữa các lần chạy, mang lại độ tái lập cho dữ liệu của bạn và sự tự tin trong các kết luận thí nghiệm mà bạn rút ra.
Tối đa hóa độ nhạy qPCR 1 bước
Định dạng hỗn hợp 4x nồng độ cao của Hỗn hợp Clara® Probe 1-Step Purple cung cấp độ nhạy và linh hoạt cao hơn bằng cách cho phép thêm nhiều mẫu vào mỗi phản ứng, và sử dụng thể tích phản ứng nhỏ hơn với sự tự tin. Khuếch đại nhanh cho phép các Cts xảy ra sớm hơn và cho phép phát hiện đáng tin cậy xuống đến bốn bản sao mục tiêu trên mỗi phản ứng 20 μL (0.8 bản sao trên mỗi μL). Đạt được sự phát hiện vượt trội ngay cả trong các mẫu loãng nhất.
Cần trợ giúp về thiết kế thí nghiệm qPCR dựa trên probe?
Hãy chắc chắn thiết kế các mồi và probe cẩn thận. Để khuếch đại hiệu quả dưới điều kiện chu kỳ nhanh, chúng tôi khuyên bạn nên chọn chiều dài amplicon giữa 80 bp và 200 bp. Với tất cả các hỗn hợp mastermix của nhà sản xuất, chiều dài amplicon càng ngắn thì phản ứng có thể chu kỳ càng nhanh. Chiều dài amplicon không nên vượt quá 400 bp. Các mồi nên có nhiệt độ nóng chảy dự đoán khoảng 60 °C, sử dụng cài đặt mặc định của Primer 3 (https://bioinfo.ut.ee/primer3/). Đối với các probe TaqMan, hãy chọn probe gần mồi 5’, tránh các dư lượng guanosine ở cuối. Đảm bảo kết hợp lý tưởng giữa thuốc nhuộm probe và quencher các kết hợp, đặc biệt trong các phản ứng đa mục tiêu.
Để biết thêm thông tin về cách thiết kế các thí nghiệm qPCR và phân tích kết quả qPCR, vui lòng tham khảo hướng dẫn kỹ thuật của chúng tôi.
Các Ứng Dụng
- Phân tích biểu hiện gene
- Phân loại gen
- Phát triển bộ dụng cụ chẩn đoán in vitro
- Phát hiện RNA & ADN đơn và đa mục tiêu
Thông số kỹ thuật
Clara® Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX
| Thành phần | 200 phản ứng | 600 phản ứng | 1000 phản ứng | 10 000 phản ứng |
|---|---|---|---|---|
| 4x Clara Probe 1-Step Purple Mix Lo-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 5 x 1 mL | 1 x 50 mL |
Clara® Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX
| Thành phần | 200 phản ứng | 600 phản ứng | 1000 phản ứng | 10 000 phản ứng |
|---|---|---|---|---|
| 4x Clara Probe 1-Step Purple Mix Hi-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 5 x 1 mL | 1 x 50 mL |
Clara® Probe 1-Step Purple Mix No-ROX
| Thành phần | 200 phản ứng | 600 phản ứng | 1000 phản ứng | 10 000 phản ứng |
|---|---|---|---|---|
| 4x Clara Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 5 x 1 mL | 1 x 50 mL |
Clara® Probe 1-Step Purple Mix Separate-ROX
| Thành phần | 200 phản ứng | 600 phản ứng | 1000 phản ứng | |
|---|---|---|---|---|
| 4x Clara Probe 1-Step Purple Mix No-ROX | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 5 x 1 mL | |
| 50 μΜ ROX Additive | 1 x 200 μL | 1 x 200 μL | 1 x 200 μL |
Clara® Probe 1-Step Mix AquaPlex
| Thành phần | 200 phản ứng | 600 phản ứng | 1000 phản ứng | 10 000 phản ứng |
|---|---|---|---|---|
| 4x Clara Probe 1-Step Mix AquaPlex | 1 x 1 mL | 3 x 1 mL | 5 x 1 mL | 1 x 50 mL |
Thông tin phản ứng
| Thể tích phản ứng | Bảo quản | |||
|---|---|---|---|---|
| 20 μL |
Khi sản phẩm đến nơi, nên bảo quản giữa -30 và -20 °C. Nếu được bảo quản đúng cách, bộ sản phẩm sẽ giữ được hoạt độ cho đến khi hết hạn sử dụng. |
Khả năng tương thích thiết bị
Sản phẩm này tương thích với tất cả các thiết bị qPCR tiêu chuẩn và nhanh. Sử dụng Công cụ lựa chọn qPCR của chúng tôi để tìm hiểu biến thể ROX nào tương thích với thiết bị của bạn.
Tài liệu
Tờ rơi sản phẩm
Hướng dẫn sử dụng
Câu hỏi thường gặp
Clara® Probe 1-Step Mix và Purple Mix có thể được sử dụng cho cả RT-PCR một bước và hai bước không?
Có. Clara® Probe 1-Step Mix có thể khuếch đại cDNA và RNA mục tiêu một cách hiệu quả như nhau. Tuy nhiên, vì hỗn hợp này chứa RTase, nên nó lý tưởng cho quy trình một bước. Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Clara® Probe 1-Step Mix cho quy trình một bước và khi các thí nghiệm yêu cầu phát hiện DNA trong một số mẫu hạn chế, và Clara® Probe Mix cho các giao thức hai bước và phát hiện DNA định kỳ.
Sản phẩm được tạo ra với Clara® và Clara® Purple mixes có thể được phân giải, nhân bản và định danh không?
Có, các sản phẩm PCR được tạo ra từ các hỗn hợp này có các đặc tính giống như các sản phẩm PCR được tạo ra từ Taq polymerase kiểu hoang dã. Chúng có thể được giải mã hoặc phân giải bằng các endonucleases giới hạn theo các giao thức chuẩn. Các sản phẩm có đuôi 3′-d(A) và có thể được sử dụng cho nhân bản TA hoặc có thể được cắt đầu bằng hoặc phân giải bằng các enzyme giới hạn trước khi nhân bản. Để đạt được kết quả tốt nhất, chúng tôi khuyên bạn nên tinh chế các sản phẩm PCR bằng bất kỳ bộ tinh chế PCR tiêu chuẩn nào.
Clara® Probe Mix và Clara® Probe 1-Step Mix có chứa phẩm nhuộm FAM không?
Khi không. Ngoài ROX (nếu có trong bộ), không có phẩm nhuộm nào khác trong các hỗn hợp của chúng tôi. Do đó, bạn có thể sử dụng bất kỳ đầu dò liên kết fluorophore nào cho phản ứng của bạn.
Có bình thường nếu độ huỳnh quang của Clara® Probe Mix và Clara® Probe 1-Step Mix khác với độ huỳnh quang đạt được với các sản phẩm của đối thủ không?
Các sản phẩm khác nhau có thể cho một mức độ huỳnh quang khác nhau. Tuy nhiên, điều này không ảnh hưởng đến độ chính xác của định lượng và giá trị Ct sẽ không khác biệt giữa các sản phẩm.
Việc lưu trữ DNA mẫu trong đệm 1x TE (10 mM Tris-HCl / 1 mM EDTA) có tương thích với qPCR tiếp theo sử dụng Clara® Probe Mix và Clara® Probe 1-Step Mix không?
Có, chất đệm lưu trữ này là tương thích. EDTA sẽ chelate một số magnesi trong hỗn hợp, nhưng không đủ lớn để ảnh hưởng đến phản ứng.
Nồng độ ROX trong Clara® Probe Mix, Clara® Probe 1-Step Mix và các hỗn hợp tím tương ứng là gì?
Các hỗn hợp Clara® Probe Purple và Clara® Probe 1-Step Purple chứa các phẩm nhuộm tham chiếu thụ động ở nhiều công thức khác nhau, mỗi công thức có nồng độ phẩm nhuộm tham chiếu thụ động khác nhau:
Các hỗn hợp Lo-ROX (PB20.65 và PB25.85) chứa 200 nM ROX.
Các hỗn hợp Hi-ROX (PB20.66 và PB25.86) chứa 2 µM ROX.
Các hỗn hợp No-ROX (PB20.67 và PB25.87) không chứa ROX.
Các hỗn hợp Separate-ROX (PB20.68 và PB25.88) bao gồm một ống riêng biệt của 50 µM phụ gia ROX. Điều này cho phép bạn chọn nồng độ ROX mà bạn muốn sử dụng.
Bạn có thể sử dụng Công cụ Lựa chọn qPCR của chúng tôi dưới menu Tài nguyên để xác định hỗn hợp nào của chúng tôi phù hợp nhất với máy qPCR của bạn.
Có khuyến nghị nào về việc khắc phục sự cố nếu có các sản phẩm không đặc hiệu trong qPCR của tôi không?
Có nhiều tùy chọn để xem xét khi tối ưu hóa phản ứng:
- Giảm thời gian khớp cặp/mở rộng xuống còn 5 giây
- Tăng nhiệt độ khớp cặp/mở rộng từ 60 lên 65°C
Pha loãng mẫu DNA bắt đầu với 5ng DNA và sử dụng chuỗi pha loãng mẫu 10x. Ngoài việc chạy những cái này trên gel để xem liệu các sản phẩm không đặc hiệu có tồn tại hay không, hiệu suất của phản ứng có thể được tính toán với phần mềm của thiết bị qPCR sau khi thực hiện pha loãng mẫu. Nếu hiệu suất nằm trong khoảng 90 – 110%, thì amplicon đang được nhân đôi mỗi chu kỳ.
Hỗn hợp này có hiệu quả cho các mẫu micro RNA không?
Có, Clara® Probe 1-Step Mix có thể được sử dụng cho các mẫu micro RNA. Mặc dù chúng tôi không bán các bộ kit dành riêng, tất cả RTase của chúng tôi đều có thể được sử dụng cho việc định lượng và phân tích miRNA.
Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng một trong hai phương pháp sau:
- Sử dụng các mồi RT tổng quát và thêm các đuôi poly(A) hoặc poly(U) (ví dụ bằng poly(U)-polymerase), sau đó thực hiện tổng hợp cDNA sử dụng các mồi tổng quát1,2.
- Sử dụng các mồi RT cụ thể và bỏ qua bước tạo đuôi1, 3-5.
Nếu bạn không quen thuộc với các chi tiết của những phương pháp đó, xin vui lòng tham khảo danh sách tài liệu dưới đây, phục vụ như một hướng dẫn.
- Dave, V. P. et al. Công nghệ khuếch đại và phát hiện microRNA: cơ hội và thách thức cho chẩn đoán tại chỗ. Lab Invest 99, 452-469, doi:10.1038/s41374-018-0143-3 (2019).
- Mei, Q. et al. Một xét nghiệm dễ dàng và cụ thể để định lượng microRNA bằng một phương pháp RT-qPCR tối ưu. PLoS One 7, e46890, doi:10.1371/journal.pone.0046890 (2012).
- Chen, C. et al. Định lượng thời gian thực microRNAs bằng cách sử dụng RT-PCR hình chóp. Nucleic Acids Res 33, e179, doi:10.1093/nar/gni178 (2005).
- Raymond, C. K., Roberts, B. S., Garrett-Engele, P., Lim, L. P. & Johnson, J. M. Xét nghiệm PCR kéo dài mồi đơn giản, định lượng nhanh để theo dõi trực tiếp microRNAs và RNA can thiệp ngắn. RNA 11, 1737-1744, doi:10.1261/rna.2148705 (2005).
- Androvic, P., Valihrach, L., Elling, J., Sjoback, R. & Kubista, M. RT-qPCR hai đuôi: một phương pháp mới cho việc định lượng miRNA chính xác cao. Nucleic Acids Res 45, e144, doi:10.1093/nar/gkx588 (2017).
Xem thêm