Clara® Inhibitor-Tolerant Probe 1-Step Mix

Đã đạt được sự khuếch đại đáng tin cậy cho nhiều mục tiêu khác nhau bằng cách sử dụng 40 chu kỳ với 1 giây biến tính và 3 giây hồi phục và kéo dài (chu trình 2 bước). Khuếch đại thành công dưới các điều kiện này đòi hỏi các amplicon phải ngắn và cần được kiểm tra trên từng mục tiêu mới khi thêm vào thí nghiệm.

Kết quả sẽ khác nhau tùy thuộc vào loài thực vật và loại mô. Hóa chất chịu được chất ức chế của chúng tôi cho thấy độ kháng vừa phải với chlorophyll và polyphenol, chẳng hạn như catechin và quercetin, nhưng độ kháng thấp với axit tannic, cellulose và pectin. Do đó, chúng tôi khuyến nghị thử nghiệm hỗn hợp trên các loại mẫu mong muốn. Tất cả các mô thực vật sẽ yêu cầu phá hủy cơ học trong một đệm chiết xuất phù hợp để đạt được sự phá vỡ các tế bào và màng trước khi sử dụng với các hỗn hợp chịu được chất ức chế. Chúng tôi khuyến nghị thử nghiệm một số phản ứng nhỏ với loại mẫu mục tiêu. Xin vui lòng liên hệ với đội ngũ của chúng tôi qua info@pcrbio.com để yêu cầu mẫu sản phẩm, hoặc nếu bạn cần trợ giúp trong việc lập kế hoạch cho các phản ứng thử nghiệm như vậy.

Mẫu nước bọt không cần xử lý trước. Tuy nhiên, việc pha loãng trong môi trường vận chuyển mẫu phù hợp là điều được khuyến nghị. Chúng tôi đặc biệt khuyến nghị sử dụng UTM không chứa guanidinum chloride.

Chúng tôi đã thực hiện thành công các phản ứng đa hợp trên tối đa 5 μL mẫu máu (1.25 μL máu thô pha loãng 1:4 trong dung dịch NaCl/EDTA) cho mỗi phản ứng 20 μL. Điều này dẫn đến việc giảm tổng thể độ huỳnh quang nhưng không ức chế các phản ứng qPCR, cũng như không giới hạn độ nhạy của hỗn hợp.

Chúng tôi đã thử nghiệm thành công lên đến 10% nước bọt thô cho mỗi phản ứng, với những kết quả tốt nhất và nhất quán nhất khi sử dụng 2.5% nước bọt

Có. Trong khi hỗn hợp này chịu được chất ức chế, nhưng không hoàn toàn kháng lại sự hiện diện của các chất ức chế. Các chất ức chế khác nhau và nồng độ cao hơn vẫn có thể ức chế các phản ứng qPCR. Với độ nhạy của hỗn hợp, nếu có sự chậm trễ đáng kể, chúng tôi khuyến nghị pha loãng mẫu trước khi sử dụng trong các phản ứng qPCR.

Có, điều này là bình thường. Các mẫu sinh học thô, đặc biệt là nước bọt, chứa các mức độ chất ức chế PCR khác nhau. Chúng tôi đã quan sát thấy một khoảng chậm từ 0.5-3.5 chu kỳ trong việc khuếch đại cùng một mục tiêu với các mẫu nước bọt khác nhau. Cùng một mẫu sinh học thô cũng có thể cho thấy các mức độ ức chế khác nhau theo thời gian.

Tất cả các hỗn hợp chịu được chất ức chế của chúng tôi đã được kiểm tra và chịu được nước bọt thô và máu thô. Thêm vào đó, chúng đã được kiểm tra rộng rãi trong sự hiện diện của nhiều chất ức chế PCR có trong hóa chất lâm sàng, thực vật, môi trường và phòng thí nghiệm. Những chất này bao gồm: hemin, haemoglobin, heparin, lactoferrin, IgG immunoglobulins, guanidine, SDS, ethanol, urê, sodium citrate, acid humic, cellulose, pectin, quercetin, catechin, axit tannic và chlorophyll B. Mức độ chịu đựng thay đổi theo từng hợp chất. Các hỗn hợp cũng có thể chịu được các hợp chất khác, không được liệt kê, hoặc chưa được thử nghiệm.