PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit là một bộ sản phẩm tiện lợi, dễ sử dụng cho việc tổng hợp cDNA nhanh chóng và hiệu quả cũng như PCR trong một ống duy nhất. Hệ thống đệm tiên tiến, enzyme reverse transcriptase và polymerase khởi động nóng cung cấp RT-PCR 1 bước cực kỳ nhạy cảm và đặc hiệu từ bất kỳ RNA mẫu nào bao gồm mRNA, RNA tổng hợp và chuỗi RNA virus. Hiện nay cũng có sẵn định dạng hỗn hợp màu đỏ với phẩm nhuộm theo dõi gel để hình dung mẫu và tải trực tiếp lên gel agarose. Đặc điểm Enzyme reverse transcriptase ổn định nhiệt RTase Go Dải nhiệt độ rộng từ 45 °C đến 55 °C Chất ức chế RNase tiên tiến Công nghệ khởi động nóng trung gian kháng thể cho khả năng phát hiện mẫu có số bản sao thấp vượt trội Năng suất PCR cao dưới các điều kiện PCR tiêu chuẩn và nhanh Khuếch đại đặc hiệu hiệu quả từ các mẫu phức tạp bao gồm các chuỗi giàu GC và AT Hỗn hợp màu đỏ với phẩm nhuộm theo dõi có sẵn cho việc tải gel trực tiếp
Còn hàng
Liên hệ
MS CATSản phẩmKích thướcGiá
PB10.53-05PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit50 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi
PB10.53-10PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit100 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi
PB10.53-50PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit500 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi
PB10.55-05PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit Red50 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi
PB10.55-10PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit Red100 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi
PB10.55-50PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit Red500 x 50 μL ReactionsLiên hệ với chúng tôi

Để xem giá của bạn, vui lòng đăng nhập hoặc đăng ký với tham chiếu báo giá của bạn.

Thông tin thêm

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit là gì?

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit là một bộ dụng cụ tiện lợi, dễ sử dụng cho việc tổng hợp cDNA nhanh chóng và hiệu quả cùng với PCR trong một ống. Hệ thống đệm được thiết kế lại và enzyme phiên mã ngược đã được sửa đổi cung cấp hiệu suất cao hơn và độ nhạy tăng lên.

Bộ kit kết hợp enzyme phiên mã ngược ổn định được sửa đổi của chúng tôi (RTase Go) với một chất ức chế RNase tiên tiến để tăng tốc độ và sản lượng tổng hợp cDNA. Bước PCR được hỗ trợ bởi PCRBIO HS Taq DNA Polymerase, mang lại hiệu suất RT-PCR mạnh mẽ với yêu cầu tối thiểu hoặc không cần tối ưu hóa. Công nghệ khởi động nóng nhờ kháng thể của chúng tôi ngăn chặn sự hình thành dimers mồi và khuếch đại không đặc hiệu, cải thiện độ nhạy và tính đặc hiệu của phản ứng so với các phương pháp khác.

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit có thể được sử dụng với bất kỳ mẫu RNA nào bao gồm mRNA, RNA tổng hợp và các trình tự RNA virus, và cung cấp khả năng phát hiện đáng tin cậy ngay cả với những mục tiêu khó khăn nhất.

Hiện có sẵn ở định dạng hỗn hợp màu đỏ để tải trực tiếp vào gel

Ngoài phiên bản tiêu chuẩn, bộ kit hiện có sẵn dưới dạng hỗn hợp màu đỏ chứa phẩm màu theo dõi màu đỏ, cho phép tải trực tiếp các sản phẩm PCR lên gel agarose mà không cần thêm đệm tải. Điều này đơn giản hóa quy trình xử lý tiếp theo, giảm số bước pipet và giảm thiểu rủi ro ô nhiễm. Nó lý tưởng cho việc phân tích điểm cuối quy mô lớn hoặc định kỳ.

Phẩm màu theo dõi di chuyển trong quá trình điện di và không làm ảnh hưởng đến hiệu suất RT-PCR hoặc độ phân giải sản phẩm. Cả hai phiên bản tiêu chuẩn và màu đỏ đều được thiết kế cho quy trình cài đặt nhất quán, dễ sử dụng và có kết quả đáng tin cậy.

Các ứng dụng

  • Phân tích biểu hiện gen
  • Phân tích phiên mã
  • Nhân bản gen
  • Multiplex RT-PCR
  • Phân tích biến thể splice
  • Nghiên cứu RNAi

Thông số kỹ thuật

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit

Thành phần 50 Phản ứng 100 Phản ứng 500 Phản ứng
20x RTase Go with RNase Inhibitor 1 x 125 μL 2 x 125 μL 10 x 125 μL
2x PCRBIO 1-Step Go Mix 1 x 1.25 mL 2 x 1.25 mL 10 x 1.25 mL

PCRBIO 1-Step Go RT-PCR Kit Red

Thành phần 50 Phản ứng 100 Phản ứng 500 Phản ứng
20x RTase Go with RNase Inhibitor 1 x 125 μL 2 x 125 μL 10 x 125 μL
2x PCRBIO 1-Step Go Mix Red 1 x 1.25 mL 2 x 1.25 mL 10 x 1.25 mL

Thông tin phản ứng

Thể tích phản ứng Lưu trữ
50 μL Khi nhận hàng, sản phẩm nên được bảo quản trong khoảng -30 đến -20 °C.
Nếu được lưu trữ đúng cách, bộ kit sẽ giữ được hoạt tính đầy đủ cho đến ngày hết hạn được chỉ định.

Câu hỏi thường gặp (FAQs)

Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng tối thiểu 2 phút để kích hoạt enzyme. Các thời gian dài hơn, lên đến 15 phút, cũng có thể được sử dụng mà không gây tác động xấu đến enzyme.

Một bước

Cả quá trình tổng hợp cDNA và phản ứng PCR diễn ra trong cùng một hỗn hợp. Tùy chọn này phù hợp cho các ứng dụng với lưu lượng cao nhờ vào tốc độ và sự dễ dàng thiết lập. Nó cũng giảm nguy cơ ô nhiễm. Tuy nhiên, nó không lý tưởng cho các mẫu RNA có chất lượng thấp hoặc nếu cDNA được yêu cầu để lưu trữ hoặc phân tích riêng.

Hai bước

Quá trình tổng hợp cDNA và phản ứng PCR diễn ra riêng biệt. Tùy chọn này phù hợp hơn nếu sản phẩm cDNA cần được giữ lại để phân tích. Nó cũng cho phép tối ưu hóa cao hơn mức phản ứng. Nó cho phép kiểm soát loại và nồng độ của enzyme, đầu vào RNA và nồng độ cDNA, điều này dẫn đến độ nhạy cao hơn so với định dạng một bước.

Không, RTase Go đã chứa một chất ức chế RNase để ngăn chặn bất kỳ sự phân hủy nào và tăng cường độ nhạy.

Nếu bạn thấy các giá trị Ct bất thường muộn, hãy thử pha loãng RNA mẫu. Bằng cách này, bạn đang pha loãng bất kỳ chất ức chế nào có thể có ở nồng độ mà chúng không ức chế phản ứng. Ngoài ra, hãy thử tăng bước phiên mã ngược lên 55 °C và tăng nhiệt độ kết dính/mở rộng. Điều này có thể giúp giải quyết các khó khăn do cấu trúc thứ cấp có mặt trong mẫu RNA và/hoặc mồi.

Trong trường hợp có sự ức chế phản ứng có thể liên quan, hãy thử giảm lượng mẫu1 hoặc thêm 0.4 – 4.4 mg/ml BSA vào phản ứng2.

Để giải quyết các vấn đề cụ thể hơn, hãy liên hệ với technical@pcrbio.com với các thông tin sau:

Kích thước amplicon

Cài đặt phản ứng

Điều kiện chu kỳ

Ảnh chụp màn hình của các đường khuếch đại và biểu đồ nóng chảy

 

1  Scipioni et al. Một xét nghiệm RT-PCR SYBR Green trong một ống duy nhất để phát hiện norovirus ở người và bò và kiểm soát sự ức chế. Tạp chí Virus học.5:94 (2008). doi: 10.1186/1743-422X-5-94

2  Plante et al. Việc sử dụng albumin huyết thanh bò để cải thiện việc phát hiện virus lây truyền qua thực phẩm được rửa từ bề mặt rau. Vi sinh ứng dụng. 52:3 (2010) doi: https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2010.02989.x

 

Việc tách mRNA thường không cần thiết. Bộ Kit PCRBIO 1-Bước Go RT-PCR đã được phát triển để hoạt động trên các mẫu có ít nhất 1 pg RNA tổng cộng hoặc 0.01 pg mRNA.

Nếu bạn đang làm việc với các loài mRNA hiếm, hãy sử dụng một mồi cụ thể cho trình tự trong phản ứng RT để tăng cường độ nhạy.

Mồi cụ thể cho gen có thể được sử dụng trong phản ứng một bước.

Bộ Kit PCRBIO 1-Bước Go RT-PCR đã được phát triển để khuếch đại các amplicon lên đến 3 kb từ DNA eukaryotic.

Bộ Kit PCRBIO 1-Bước Go RT-PCR đã được phát triển cho RT-PCR điểm cuối. qPCRBIO Probe 1-Bước Go và qPCRBIO SyGreen 1-Bước Detect|Go là các tùy chọn dựa trên đầu dò và phẩm nhuộm cho RT-PCR thời gian thực, tương ứng.

Có, bộ Kit PCRBIO 1-Bước Go RT-PCR có thể được sử dụng cho các mẫu RNA nhỏ. Mặc dù chúng tôi không bán các bộ Kit chuyên dụng, tất cả các RTase của chúng tôi đều có thể được sử dụng để định lượng và phân tích miRNA.

Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng một trong hai phương pháp sau:

  • Sử dụng mồi RT chung và thêm đuôi poly(A) hoặc poly(U) (ví dụ: bằng poly(U)-polymerase), sau đó là tổng hợp cDNA bằng các mồi chung1,2.
  • Sử dụng mồi RT cụ thể và bỏ qua bước thêm đuôi1,3-5.

Nếu bạn không quen thuộc với các chi tiết của các phương pháp đó, vui lòng tham khảo danh sách tài liệu tham khảo bên dưới, mà có thể làm hướng dẫn.

1  Dave, V. P. et al. Các công nghệ khuếch đại và phát hiện microRNA: cơ hội và thử thách cho chẩn đoán tại điểm chăm sóc. Lab Invest 99, 452-469, doi:10.1038/s41374-018-0143-3 (2019).

2  Mei, Q. et al. Một phương pháp dễ dàng và cụ thể để định lượng microRNA bằng một phương pháp RT-qPCR tối ưu. PLoS One 7, e46890, doi:10.1371/journal.pone.0046890 (2012).

3  Chen, C. et al. Định lượng thời gian thực microRNA bằng RT-PCR vòng stem-loop. Nucleic Acids Res 33, e179, doi:10.1093/nar/gni178 (2005).

4  Raymond, C. K., Roberts, B. S., Garrett-Engele, P., Lim, L. P. & Johnson, J. M. Phương pháp PCR kéo dài mồi đơn giản, định lượng để theo dõi trực tiếp microRNA và RNA can thiệp ngắn. RNA 11, 1737-1744, doi:10.1261/rna.2148705 (2005).

5  Androvic, P., Valihrach, L., Elling, J., Sjoback, R. & Kubista, M. RT-qPCR hai đuôi: một phương pháp mới cho việc định lượng miRNA chính xác cao. Nucleic Acids Res 45, e144, doi:10.1093/nar/gkx588 (2017).
Đã thêm vào giỏ hàng
Xem giỏ hàng và thanh toán