| Số CAT | Sản phẩm | Kích thước | Giá |
|---|---|---|---|
| PB71.11-01 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Lo-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.11-05 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Lo-ROX | 500 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.12-01 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Hi-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.12-05 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Hi-ROX | 500 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.14-01 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Separate-ROX | 100 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.14-05 | NGSBIO Library Quant Kit for Illumina® Separate-ROX | 500 x 20 μL Reactions | Contact us |
| PB71.22-05 | NGSBIO DNA Standards for Illumina® | 500 x 20 μL Reactions | Contact us |
Để xem giá của bạn, vui lòng đăng nhập hoặc đăng ký với tham chiếu báo giá của bạn.
Thông tin thêm
Bộ định lượng Thư viện NGSBIO cung cấp một phương pháp định lượng dựa trên qPCR đáng tin cậy cho việc định lượng các thư viện được chuẩn bị cho các hệ thống NGS Illumina. Bộ sản phẩm bao gồm 5 tiêu chuẩn DNA, các mồi đặc hiệu cho trình tự adapter P5 và P7 của Illumina và qPCRBIO SyGreen® Mix. Hệ thống đệm qPCR tiên tiến đã được phát triển bằng công nghệ sàng lọc thông minh có thông lượng cao của chúng tôi nhằm đảm bảo khuếch đại hiệu quả cho tất cả các thư viện của bạn, bao gồm cả các thư viện có độ giàu GC hoặc AT. Bộ sản phẩm cũng đi kèm với một dung dịch pha loãng thư viện tiện lợi. Bộ này cũng có thể được sử dụng kết hợp với VeriFi™ Library Amplification Mix.
Định lượng Thư viện Chính xác
qPCR được coi là phương pháp tốt nhất để định lượng các thư viện NGS vì nó chỉ đo các phân tử gắn vào adapter có thể được sử dụng làm mẫu cho việc khuếch đại thư viện và tạo cụm. Bộ định lượng Thư viện NGSBIO cho phép định lượng rất chính xác, điều này rất quan trọng cho mật độ cụm tối ưu và hiệu suất giải trình tự cao hơn.
Định lượng thư viện có thể được thực hiện bất kỳ lúc nào sau khi liên kết adapter và luôn nên được thực hiện trước khi tạo cụm. Để phân tích dữ liệu dễ dàng và chính xác, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Công cụ Định lượng Thư viện NGSBIO. Việc ước lượng quá cao nồng độ thư viện có thể dẫn đến mật độ cụm không đủ và ước lượng thấp nồng độ thư viện có thể dẫn đến mật độ cụm cao, bão hòa. Để tìm hiểu thêm về mật độ cụm tối ưu, hãy tham khảo hướng dẫn của máy Illumina của bạn.
Phạm vi động rộng
Các tiêu chuẩn DNA được cung cấp được đo một cách chính xác và sẵn sàng sử dụng, bao gồm phạm vi từ 2pM đến 0.2fM. Bộ sản phẩm phù hợp cho việc định lượng các thư viện có nồng độ thấp kể cả các thư viện được xây dựng mà không cần bước khuếch đại PCR.
Bộ sản phẩm Thiết kế Chung
Bộ định lượng Thư viện NGSBIO tương thích với tất cả các nền tảng qPCR và đã được tối ưu hóa để cung cấp định lượng thư viện nhất quán và có thể tái lập trên một loạt các loại mẫu, kích thước đoạn (lên đến 1000bp), nồng độ và hàm lượng GC. Sử dụng Công cụ Lựa chọn qPCR của chúng tôi để tìm hiểu biến thể ROX nào tương thích với thiết bị của bạn.
Để phân tích dữ liệu dễ dàng và chính xác, chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng Công cụ Định lượng Thư viện NGSBIO.
Các ứng dụng
- Định lượng thư viện NGS cho các hệ thống Illumina
Thông số kỹ thuật
NGSBIO Library Quant Kit for Illumina Lo-ROX
| Thành phần | 100 Phản ứng | 500 Phản ứng |
|---|---|---|
| 2x qPCRBIO SyGreen Mix Lo-ROX | 1 x 1mL | 5 x 1mL |
| DNA Standards 1-5 | 30μL mỗi loại | 85μL mỗi loại |
| 10x Illumina Primers | 1 x 0.2mL | 1 x 1mL |
| 10x Dilution Buffer | 1 x 0.6mL | 2 x 1.5mL |
NGSBIO Library Quant Kit for Illumina Hi-ROX
| Thành phần | 100 Phản ứng | 500 Phản ứng |
|---|---|---|
| 2x qPCRBIO SyGreen Mix Hi-ROX | 1 x 1mL | 5 x 1mL |
| DNA Standards 1-5 | 30μL mỗi loại | 85μL mỗi loại |
| 10x Illumina Primers | 1 x 0.2mL | 1 x 1mL |
| 10x Dilution Buffer | 1 x 0.6mL | 2 x 1.5mL |
NGSBIO Library Quant Kit for Illumina Separate-ROX
| Thành phần | 100 Phản ứng | 500 Phản ứng |
|---|---|---|
| 2x qPCRBIO SyGreen Mix No-ROX | 1 x 1mL | 5 x 1mL |
| 50μM ROX Additive | 1 x 200μL | 1 x 200μL |
| DNA Standards 1-5 | 30μL mỗi loại | 85μL mỗi loại |
| 10x Illumina Primers | 1 x 0.2mL | 1 x 1mL |
| 10x Dilution Buffer | 1 x 0.6mL | 2 x 1.5mL |
NGSBIO DNA Standards for Illumina
| Thành phần | 500 Phản ứng |
|---|---|
| DNA Standards 1-5 | 85μL mỗi loại |
Thông tin phản ứng
| Thể tích phản ứng | Lưu trữ | |||
|---|---|---|---|---|
| 20μL |
Khi nhận hàng, sản phẩm nên được lưu trữ giữa -30 và -20 °C. Nếu được lưu trữ đúng cách, bộ sản phẩm sẽ duy trì hoạt động đầy đủ cho đến ngày hết hạn được chỉ định. |
Tính tương thích của thiết bị
Sản phẩm này tương thích với tất cả các thiết bị qPCR chuẩn và nhanh. Sử dụng công cụ lựa chọn qPCR của chúng tôi để tìm ra biến thể ROX nào tương thích với thiết bị của bạn.
Tài liệu
Tờ rơi sản phẩm
Hướng dẫn sử dụng
Câu hỏi thường gặp (FAQs)
Mẫu của tôi nằm ngoài khoảng tiêu chuẩn. Bạn có đề xuất khắc phục nào không?
Kiểm tra đường cong tan chảy để đảm bảo rằng có một đỉnh duy nhất. Nếu bạn thấy nhiều đỉnh, có thể có sự ô nhiễm hoặc các đầu nối chưa được liên kết. Ngược lại, nếu các mẫu xuất hiện trước DNA Tiêu chuẩn 1, hãy pha loãng mẫu 100 lần và lặp lại. Nếu các mẫu xuất hiện sau DNA Tiêu chuẩn 5, hãy sử dụng một mẫu có nồng độ cao gấp 100 lần.
Đường cong tiêu chuẩn của tôi không đều. Điều này có quan trọng không?
Nếu hiệu suất tổng thể của đường cong tiêu chuẩn của bạn nằm trong khoảng 90% – 110% và giá trị R2 của bạn gần bằng 1, thì điều này không cần lo lắng. Miễn là độ dốc của đường qua tất cả các tiêu chuẩn nằm trong khoảng 3.1 – 3.6, việc định lượng sẽ chính xác.
Hiệu suất của đường cong tiêu chuẩn của tôi không nằm trong khoảng 90 – 110%. Bạn có đề xuất khắc phục nào không?
Kiểm tra đường cong để phát hiện các điểm ngoại lệ. Nếu bất kỳ điểm dữ liệu nào có vẻ xa khỏi đường cong đã khớp, hãy xóa điểm dữ liệu đó và xem liệu hiệu suất có cải thiện không. Cần ít nhất ba tiêu chuẩn cho một đường cong tiêu chuẩn đáng tin cậy, vì vậy có thể xóa hoàn toàn tối đa hai tiêu chuẩn. Tuy nhiên, mỗi tiêu chuẩn cần ít nhất hai phép đo, và chỉ những mẫu nằm trong các tiêu chuẩn còn lại mới có thể được định lượng.
Kiểm tra No Template Control (NTC) để đảm bảo nó có Cq lớn hơn DNA Tiêu chuẩn 5. Nếu NTC nằm trong phạm vi của các tiêu chuẩn, có thể có sự ô nhiễm trong các tiêu chuẩn hoặc hỗn hợp phản ứng. Điều này có thể đến từ các mẫu khác trên đĩa, hoặc dấu vết của các thư viện khác còn lại trên bề mặt hoặc thiết bị phòng thí nghiệm. Làm sạch tất cả các dụng cụ và bề mặt một cách kỹ lưỡng và lặp lại thí nghiệm với các aliquot mới của các hóa chất.
Điều gì xảy ra nếu tôi thấy các đỉnh đáng kể khác trong phân tích tan chảy của các mẫu của tôi?
Nếu đỉnh trùng với vai thấy trong các đỉnh tan chảy của tiêu chuẩn, rất có thể đó là sự khuếch đại của các mồi Illumina®. Điều này có thể xảy ra khi tỷ lệ mồi/mẫu quá cao, hoặc khi có lượng lớn các đầu nối chưa được liên kết. Nếu đỉnh là đáng kể, kết quả định lượng sẽ không đáng tin cậy và thí nghiệm nên được lặp lại. Đảm bảo rằng lượng mồi đúng đã được thêm vào hỗn hợp và sử dụng nồng độ mẫu cao hơn nếu có thể. Nếu vấn đề vẫn tiếp diễn, thư viện có thể cần được chọn kích thước lại để loại bỏ các đầu nối tự do.
Nếu quan sát thấy nhiều đỉnh không tương ứng với đỉnh đầu nối, nguyên nhân có thể là ô nhiễm hoặc không thành công trong bước chọn kích thước trong quá trình chuẩn bị thư viện. Lặp lại phép đo với các pha loãng mới của thư viện. Nếu vấn đề vẫn tiếp diễn, thư viện đó có thể cần trải qua việc chọn kích thước thêm.
Điều gì xảy ra nếu tôi thấy các đỉnh đáng kể khác trong phân tích tan chảy của các tiêu chuẩn của tôi?
Bình thường sẽ thấy một vai nhẹ ở phía nhiệt độ thấp của đỉnh tan chảy mẫu. Nếu vai đó rất lớn, có thể là do đã thêm quá nhiều hỗn hợp Mồi Illumina® hoặc không đủ lượng tiêu chuẩn đã được thêm. Trong trường hợp này, thí nghiệm nên được lặp lại với sự cẩn thận đặc biệt trong khi làm hỗn hợp và khi thêm các tiêu chuẩn vào phản ứng.
Nếu quan sát thấy nhiều đỉnh trong các đường cong tan chảy của các tiêu chuẩn, thì có thể đã có sự ô nhiễm được đưa vào phản ứng. Nếu nó xuất hiện trong tất cả các tiêu chuẩn, sự ô nhiễm nằm trong hỗn hợp chính. Thí nghiệm nên được lặp lại với các aliquot mới của các hóa chất. Nếu nó chỉ xuất hiện trong các bản sao của một tiêu chuẩn, aliquot tiêu chuẩn đó đã bị ô nhiễm và phải bị loại bỏ.
Điều gì xảy ra nếu giá trị R2 của tôi không nằm trong khoảng 0.99 và 1.00?
Nếu giá trị R2 không gần 1, điều này cho thấy các tiêu chuẩn không được phân bố đều. Kiểm tra biểu đồ đường cong tiêu chuẩn và loại bỏ bất kỳ điểm nào xa khỏi đường. Miễn là có ba tiêu chuẩn với hai phép đo mỗi tiêu chuẩn, việc định lượng sẽ chính xác.
Nếu bạn không thể đưa chất lượng của sự khớp đạt đến mức cần thiết, thí nghiệm nên được lặp lại. Hãy đặc biệt chú ý khi pipett các tiêu chuẩn để đảm bảo các thể tích chính xác và ngăn ngừa ô nhiễm.
Điều gì xảy ra nếu kết quả đo của tôi với Bộ Kiểm Tra Thư Viện NGSBIO không nhất quán với phép đo của Qubit, quang phổ kế hoặc phương pháp đo khác?
Các dụng cụ như Qubit hoặc quang phổ kế đo tổng lượng DNA có trong dung dịch. Điều này cũng đúng với các phép đo nồng độ của một Agilent Bioanalyser. Bộ Kiểm Tra Thư Viện NGSBIO cho Illumina® sẽ chỉ định lượng các phân tử có cả hai đầu nối. Ngoài ra, qPCR là một phương pháp chính xác hơn nhiều trong việc định lượng DNA so với các phương pháp huỳnh quang hoặc quang phổ. Việc các phương pháp đo khác nhau không đồng nhất là điều bình thường.
Nếu nồng độ đo được bằng qPCR thấp hơn nhiều so với nồng độ đo được bằng phương pháp khác, điều này cho thấy chỉ một tỷ lệ nhỏ phân tử đã được liên kết đúng cách các đầu nối trong quá trình liên kết đầu nối.
Tôi nên làm gì nếu các bản sao mẫu của tôi cho thấy sự biến đổi đáng kể?
Kiểm tra các đường cong tan chảy để đảm bảo có một đỉnh sản phẩm duy nhất. Nếu có nhiều đỉnh, điều này cho thấy mẫu có thể đã bị ô nhiễm hoặc phân hủy, hoặc đã xảy ra lỗi trong quá trình chọn kích thước, liên kết đầu nối hoặc chuẩn bị thư viện. Nếu phân tích tan chảy chỉ hiển thị một đỉnh, sự biến đổi có thể do pipetting không chính xác. Tạo một pha loãng mới của mẫu và lặp lại thí nghiệm, đặc biệt chú ý đến việc pipett các bản sao một cách chính xác. Nếu vấn đề vẫn tiếp diễn, có thể cần tạo một thư viện mới.
Tôi nên làm gì nếu các bản sao tiêu chuẩn của tôi cho thấy sự biến đổi đáng kể?
Sự biến đổi ± 0.2 chu kỳ giữa các bản sao là bình thường. Kiểm tra các đường cong tan chảy để đảm bảo có một đỉnh sản phẩm duy nhất. (Có thể có một vai có trọng lượng phân tử thấp ở đó, điều này là bình thường). Nếu có nhiều đỉnh, điều này cho thấy các tiêu chuẩn đã bị ô nhiễm hoặc phân hủy. Nếu tiêu chuẩn đó có thể bị loại khỏi phân tích, hãy làm vậy. Nếu không, hãy đặt hàng các tiêu chuẩn mới và lặp lại thí nghiệm.
Nếu các đường cong tan chảy hiển thị một đỉnh duy nhất trùng với nhau giữa các bản sao, sự biến đổi có thể do pipetting không chính xác. Lặp lại thí nghiệm, đặc biệt chú ý đến việc pipett các tiêu chuẩn một cách chính xác.
Xem thêm