IsoFast® Bst Polymerase

Có, IsoFast® Bst Polymerase có thể bị bất hoạt bằng cách đun nóng ống thử ở >80°C trong 10 phút.

Có, enzyme hoạt động trong khoảng nhiệt độ từ 50°C đến 70°C, với nhiệt độ tối ưu từ 60°C đến 65°C. Chúng tôi không khuyến nghị sử dụng ở nhiệt độ cao hơn 70°C vì nó sẽ bị bất hoạt do nhiệt.

Rất tiếc, không thể, vì nhiệt độ phản ứng quá cao cho sự ổn định của enzyme.

Có, IsoFast® Bst Polymerase có thể hoạt động như một sự thay thế hợp lệ cho DNA polymerase I, Klenow Fragment trong các ứng dụng này.

Sau khi phản ứng enzyme cắt hạn chế, các đầu của phân tử DNA có thể còn lại bằng phẳng, với phần nhô ra 5′ (đầu lùi 3′) hoặc phần nhô ra 3′ (đầu lùi 5′).

IsoFast® Bst Polymerase chỉ có hoạt động polymerase từ 5’ đến 3’ nhưng không có hoạt động exonuclease từ 5’ đến 3’ hoặc từ 3’ đến 5’ (tức là polymerase không có hoạt động sửa lỗi). Do đó, nó chỉ có thể được sử dụng để lấp đầy các phần nhô ra 5′ (tạo đầu phẳng), nhưng không thể loại bỏ các phần nhô ra 3′ hoặc 5′, vì nó thiếu hoạt động exonuclease.

Có, nhưng khi dUTP thay thế hơn 50% dTTP trong phản ứng thì việc tích hợp sẽ bị ức chế đáng kể.

Có, nó có thể bắt đầu tổng hợp sợi tại vị trí đứt sử dụng mảnh ở đầu 3′ làm mồi. Và nhờ vào hoạt động thay thế sợi, nó có thể tiếp tục cho đến khi kết thúc phân tử hoặc cho đến khi nó tách ra khỏi DNA.

Có, nhưng nó quá thấp để sử dụng trong các ứng dụng chuyển ngược. Đối với một số bộ mồi và mục tiêu, IsoFast® Bst Polymerase có thể được sử dụng như một enzyme đơn (RT/DNA polymerase), nhưng chúng tôi khuyên nên sử dụng một transcriptase ngược chuyên dụng như trong IsoFast® Bst 1-Step Mix.

Thuốc nhuộm huỳnh quang xen kẽ được cung cấp với nồng độ 20x. Khuyên dùng 1.25μL cho mỗi phản ứng 25μL khi theo dõi phản ứng trên hầu hết các dụng cụ qPCR thời gian thực. Kênh FAM của các thiết bị huỳnh quang thời gian thực thông dụng có thể được sử dụng để đọc thuốc nhuộm.

Sự khuếch đại của bất kỳ mục tiêu nào thay đổi tùy theo nhiều yếu tố bao gồm thiết kế mồi, chất lượng và số lượng mẫu. Thông thường, các bộ kit trong dòng IsoFast™ Bst sẽ đạt được kết quả dương tính trong khoảng thời gian từ 5 đến 30 phút.

Có. Cả dung dịch đệm và hỗn hợp đã chứa dNTPs, vì vậy không cần đặt hàng riêng dNTPs.

IsoFast® Bst Polymerase là một DNA polymerase có hoạt động thay thế sợi rất tốt. Vì nó đã được tách ra từ vi khuẩn hơi nhiệt Bacillus stearothermophilus (gần đây đã được đổi tên thành Geobacillus stearothermophilus), nhiệt độ tối ưu từ 60-65°C cao hơn so với DNA Polymerase I, Klenow Fragment hoặc so với các polymerase phi29 (37°C), là những polymerase thay thế sợi thường được sử dụng.

Điều này hữu ích trong việc thiết kế các chiến lược giải trình tự cũng như các công nghệ khuếch đại isothermal. Ví dụ, nhiệt độ phản ứng cao hơn tạo điều kiện thuận lợi cho việc giải trình tự qua các vùng giàu GC.