IsoFast® Bst 1-Step Mix

Có, cả IsoFast® Bst Polymerase và RTase Go đều có thể bị vô hoạt bằng cách đun ống ở nhiệt độ >80°C trong 10 phút.

Có, enzyme hoạt động trong khoảng từ 57°C đến 65°C. Chúng tôi không khuyến nghị sử dụng nó ở các nhiệt độ ngoài khoảng này vì hoạt động sẽ giảm.

Rất tiếc, không thể, vì nhiệt độ phản ứng quá cao cho sự ổn định của enzyme.

Có, nhưng nó quá thấp để sử dụng trong các ứng dụng phiên mã ngược. Đối với một số bộ mồi và mục tiêu, IsoFast® Bst Polymerase có thể được sử dụng như một enzyme đơn (RT/DNA polymerase), nhưng chúng tôi khuyến nghị sử dụng enzyme phiên mã ngược RTase Go như đã chỉ định.

Thuốc nhuộm huỳnh quang intercalating được cung cấp ở nồng độ 20x. Khuyến nghị sử dụng 1.25μL cho mỗi 25μL phản ứng khi theo dõi các phản ứng trên hầu hết các thiết bị qPCR thời gian thực. Kênh FAM của các máy đo huỳnh quang thời gian thực thông thường có thể được sử dụng để đọc thuốc nhuộm.

Sự khuếch đại của bất kỳ mục tiêu nào thay đổi tùy thuộc vào nhiều yếu tố bao gồm thiết kế mồi, chất lượng và số lượng mẫu. Thông thường, các bộ kit trong dòng IsoFast™ Bst sẽ đạt được kết quả dương tính trong khoảng từ 5 đến 30 phút.

Có. Cả dung buffer và hỗn hợp đã chứa dNTPs, vì vậy không cần phải đặt hàng dNTPs riêng.

Bộ kit gồm có 2x IsoFast® Bst Mix (bao gồm dung buffer khuếch đại, dNTPs, MgSO4, IsoFast® Bst polymerase) và RTase Go với nồng độ tối ưu cho khuếch đại isothermal phiên mã ngược. Bộ kit cũng chứa một ống thuốc nhuộm huỳnh quang 20x có thể liên kết với dsDNA để phát hiện sản phẩm thời gian thực. Người dùng chỉ cần thêm mồi và RNA mục tiêu.

IsoFast® Bst Polymerase là một DNA polymerase với hoạt tính tách chuỗi rất tốt. Do nó được tách ra từ vi khuẩn ưa nhiệt vừa phải Bacillus stearothermophilus (gần đây được đổi tên thành Geobacillus stearothermophilus), nhiệt độ tối ưu là 60-65°C cao hơn so với DNA Polymerase I, Mảnh Klenow hoặc phi29 polymerases (37°C), các polymerase tách chuỗi thường được sử dụng khác.

Điều này hữu ích trong việc thiết kế các chiến lược giải trình tự cũng như công nghệ khuếch đại isothermal. Ví dụ, nhiệt độ phản ứng cao hơn giúp dễ dàng giải trình tự qua các vùng giàu GC.