| Số CAT | Sản phẩm | Kích thước | Giá |
|---|---|---|---|
| PB90.02-03 | Lyo-Ready Probe Mix | 600 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB90.02-10 | Lyo-Ready Probe Mix | 2000 x 20 μL Reactions (2 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB90.02-50 | Lyo-Ready Probe Mix | 10 000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB90.13-03 | Pre-Lyo Probe 1-Step Evaluation Kit | 600 x 20 μL Reactions | Liên hệ với chúng tôi |
| PB90.14-10 | Lyo-Ready Probe 1-Step Kit | 2000 x 20 μL Reactions (2 x 5 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
| PB90.14-50 | Lyo-Ready Probe 1-Step Kit | 10 000 x 20 μL Reactions (1 x 50 mL) | Liên hệ với chúng tôi |
Để xem giá của bạn, vui lòng đăng nhập hoặc đăng ký với mã báo giá của bạn.
Thông tin thêm
Bộ kit Lyo-Ready Probe 1-Step được pha chế đặc biệt để phát hiện RNA siêu nhạy bằng cách sử dụng RT-qPCR dựa trên probe và lý tưởng cho việc phát triển các xét nghiệm chẩn đoán được đông khô.
Tối ưu hóa cho quá trình đông khô
Quá trình đông khô mang lại nhiều lợi ích bao gồm lưu trữ ở nhiệt độ phòng, thời gian bảo quản kéo dài và tăng tính linh hoạt trong thể tích mẫu. Bộ kit đã được tối ưu hóa để cung cấp hiệu suất cao như bộ kit RT-qPCR 1 bước tiêu chuẩn của chúng tôi sau khi đông khô.
RT-qPCR mạnh mẽ và đáng tin cậy
Bộ kit Lyo-Ready Probe 1-Step bao gồm một hỗn hợp qPCR 4x không chứa glycerol, có chứa Taq polymerase khởi động nóng, dNTPs, MgCl2 và một hỗn hợp các tá dược để đảm bảo quá trình đông khô đáng tin cậy, không bị mất hoạt tính. Công nghệ khởi động nóng trung gian kháng thể đảm bảo khuếch đại cụ thể của cDNA bắt nguồn từ virus, với khả năng chống lại các chất ức chế PCR phổ biến có trong các mẫu lâm sàng.
UltraScript® Reverse Transcriptase được cung cấp riêng trong định dạng cực kỳ tập trung 3200x. Được thiết kế đặc biệt để tăng tốc độ và hiệu suất tổng hợp cDNA với sự đại diện chính xác của transcript, enzyme phiên mã ngược MMLV biến đổi này có khả năng ổn định nhiệt và cho phép phiên mã ngược nhanh và hiệu quả lên đến 55 °C.
Phát hiện SARS-CoV-2
Bộ kit đã được xác nhận cho việc phát hiện SARS-CoV-2 trong chế độ đơn (xem Hình 1) và đa hình (xem Hình 2) và cung cấp hiệu suất đáng tin cậy mà không bị mất hiệu suất hoặc độ nhạy sau khi đông khô.
Phát triển xét nghiệm chẩn đoán tùy chỉnh
Tại PCR Biosystems, chúng tôi hiểu rằng mỗi xét nghiệm chẩn đoán phân tử đều khác nhau và quá trình đông khô chúng có thể gặp khó khăn. Để hỗ trợ công việc xác minh ban đầu, chúng tôi cung cấp Bộ kit Đánh giá Pre-Lyo Probe 1-Step cho mục đích thử nghiệm.
ISO 13485
Bộ kit Lyo-Ready Probe 1-Step đã được sản xuất dưới hệ thống quản lý chất lượng được chứng nhận ISO 13485 và phù hợp cho việc sản xuất tiếp theo như một thành phần, thuốc thử hoặc phối hợp thuốc thử cho chẩn đoán sinh học phân tử.
Ứng dụng
- Phát triển các xét nghiệm chẩn đoán phân tử đông khô
- Phát hiện các mục tiêu có số bản sao cực kỳ thấp
- Chấp nhận với các probe TaqMan®, Scorpions® và beacon phân tử
Thông số kỹ thuật
Lyo-Ready Probe 1-Step Kit
| Thành phần | 2000 phản ứng | 10 000 phản ứng | 100 000 phản ứng |
|---|---|---|---|
| 4x Lyo-Ready Probe Mix | 2 x 5 mL | 1 x 50 mL | 1 x 500 mL |
| 3200x UltraScript RTase (with RNase inhibitor) | 1 x 12.5 μL | 1 x 62.5 μL | 1 x 625 μL |
Pre-Lyo Probe 1-Step Evaluation Kit
| Thành phần | 600 phản ứng | ||
|---|---|---|---|
| 4x Lyo-Ready Probe Mix | 3 x 1 mL | ||
| 20x UltraScript RTase (with RNase inhibitor) | 1 x 600 µL |
Lyo-Ready Probe Mix
| Thành phần | 600 phản ứng | 2000 phản ứng | 10 000 phản ứng | 100 000 phản ứng |
|---|---|---|---|---|
| 4x Lyo-Ready Probe Mix | 3 x 1 mL | 2 x 5 mL | 1 x 50 mL | 1 x 500 mL |
Thông tin phản ứng
| Thể tích phản ứng | Không gian lưu trữ | ||
|---|---|---|---|
| 20 μL |
Khi nhận hàng, sản phẩm nên được lưu trữ ở nhiệt độ từ -30 đến -20 °C. Nếu được lưu trữ đúng cách, bộ sản phẩm sẽ giữ được hoạt tính đầy đủ cho đến ngày hết hạn được chỉ định. |
Tài liệu
Tờ rơi sản phẩm
Hướng dẫn sử dụng
Các câu hỏi thường gặp (FAQs)
Giá trị Ct nào thì kết quả không đáng tin cậy?
Các giá trị Ct có thể khác nhau giữa các nồng độ mẫu, tối ưu hóa phản ứng, thiết bị và phòng thí nghiệm, vì vậy cần thận trọng khi chọn giá trị Ct cắt. Thông thường, các giá trị Ct trên 35-40 sẽ bắt đầu được coi là không đáng tin cậy. Tuy nhiên, giá trị Ct trễ có thể được quan sát thấy đối với các phản ứng không hiệu quả với số lượng mẫu thấp. Thực hành tốt nhất là chuẩn hóa các cắt với các phương pháp định lượng tương đối hoặc tuyệt đối. Cũng nên chạy và phân tích đường đỉnh nóng chảy hoặc gel của các sản phẩm để xác định sản phẩm từ bất kỳ sự khuếch đại trễ nào.
Có thể thêm các thành phần khác vào Lyo-Ready Probe 1-Step Mix trước khi đông khô không?
Chúng tôi chưa kiểm tra bất kỳ thành phần nào khác để thêm vào Lyo-Ready Probe 1-Step Mix ngoài các mồi, dò và ROX. Nếu bạn muốn thêm các thành phần tương thích với đông khô khác, bạn sẽ cần kiểm tra hoạt tính của chúng trong cả hỗn hợp ẩm và vật liệu đã đông khô, cũng như đánh giá độ ổn định của chúng theo thời gian. PCR Biosystems không chịu trách nhiệm cho bất kỳ sự giảm hiệu suất nào do thành phần được thêm vào gây ra.
Có thể thêm ROX vào Lyo-Ready Probe 1-Step Mix không và nó có thể ảnh hưởng tiêu cực đến phản ứng không?
Có, ROX (6-carboxy-X-rhodamine), được cung cấp riêng, có thể được thêm vào bộ và nó sẽ không ảnh hưởng đến quá trình đông khô.
ROX được sử dụng như một phẩm màu tham chiếu thụ động trong các thiết bị PCR thời gian thực phụ thuộc ROX để chuẩn hóa cho các biến đổi về mức độ huỳnh quang có thể xuất hiện chủ yếu do biến đổi đường quang giữa các giếng. Việc chuẩn hóa cường độ huỳnh quang (Rn) được thực hiện trong phần mềm PCR thời gian thực bằng cách chia cường độ phát xạ của tín hiệu cụ thể cho cường độ phát xạ của ROX.
ROX không tham gia vào phản ứng PCR và các mức độ huỳnh quang của nó không tỷ lệ thuận với số lượng mẫu trong mỗi giếng, vì vậy việc thêm fluorophore này vào hỗn hợp cung cấp một tín hiệu huỳnh quang liên tục trong quá trình khuếch đại.
Các loại thiết bị PCR thời gian thực khác nhau yêu cầu chuẩn tham chiếu thụ động có các nồng độ ROX tối ưu khác nhau, chủ yếu là do các cấu hình quang khác nhau của mỗi hệ thống (tức là, loại nguồn kích thích và quang học khác nhau được sử dụng).
Việc thêm quá ít hoặc quá nhiều ROX sẽ dẫn đến tín hiệu rất ồn gây ảnh hưởng đến kết quả của phản ứng. Do đó, người dùng cần:
- Xác định nồng độ ROX chính xác để tối ưu hóa kết quả PCR thời gian thực, và
- Kiểm tra các thiết lập ROX trên phần mềm dùng để thiết lập phản ứng
Có thể tìm thấy một công cụ chọn lựa hữu ích cho các hệ thống thường được sử dụng nhất tại đây.
Có thể thay đổi thời gian kích hoạt cho HS Taq DNA Polymerase không?
Chúng tôi khuyên bạn nên sử dụng ít nhất 2 phút để kích hoạt polymerase. Thời gian lâu hơn lên đến 15 phút cũng có thể được sử dụng mà không ảnh hưởng xấu đến enzym.
Tôi có cần sử dụng một chất ức chế RNase trong phản ứng RT của tôi không?
Không, 3200x UltraScript® RTase được cung cấp trong bộ đã chứa một chất ức chế RNase để ngăn ngừa bất kỳ sự phân hủy nào và tăng độ nhạy.
Khắc phục sự cố chung cho sản phẩm thấp hoặc giá trị Ct trễ
Nếu bạn quan sát thấy giá trị Ct trễ bất thường, hãy thử pha loãng RNA mẫu. Bằng cách này, bạn đang pha loãng bất kỳ chất ức chế nào có thể có ở nồng độ mà chúng không ức chế phản ứng. Ngoài ra, hãy thử tăng bước phiên mã ngược lên 55 °C và tăng nhiệt độ nối/ mở rộng. Điều này có thể giúp giải quyết các khó khăn gây ra bởi các cấu trúc thứ cấp có trong mẫu RNA và/hoặc các mồi.
Trong những trường hợp mà có thể có sự ức chế phản ứng, hãy thử giảm lượng mẫu1 hoặc thêm 0.4 – 4.4 mg/ml BSA vào phản ứng2.
Đối với các vấn đề cụ thể hơn, hãy liên hệ technical@pcrbio.com với thông tin sau:
- Kích thước sản phẩm
- Thiết lập phản ứng
- Điều kiện chu kỳ
- Ảnh chụp màn hình của các dấu vết khuếch đại và hồ sơ nóng chảy
1 Scipioni et al. Một thử nghiệm RT-PCR SYBR Green trong một ống để phát hiện virus norovirus ở người và bò và kiểm soát sự ức chế. Tạp chí Virology.5:94 (2008). doi: 1186/1743-422X-5-94
2 Plante et al. Việc sử dụng albumin huyết thanh bò để cải thiện việc phát hiện RT-qPCR virus thực phẩm rửa từ bề mặt rau. Khoa học Vi sinh ứng dụng. 52:3 (2010) doi: https://doi.org/10.1111/j.1472-765X.2010.02989.x
Tôi nên xử lý bộ Lyo-Ready Probe 1-Step như thế nào?
Bộ Lyo-Ready Probe 1-Step chứa 2 thành phần: 4x Lyo-Ready Probe Mix và 3200x UltraScript® Reverse Transcriptase (RTase). Nên thêm 1.25 μL của 3200x UltraScript RTase cho mỗi mL của 4x Lyo-Ready Probe Mix được sử dụng. Do nồng độ cao của RTase, thể tích được cung cấp rất nhỏ, vì vậy chúng tôi khuyên bạn nên quay ống mỗi lần trước khi pipet thể tích enzym mong muốn.
Trong khi 2 thành phần của bộ ổn định và có thời gian sử dụng lâu hơn (xem ngày hết hạn của mỗi thành phần), hỗn hợp 4x Lyo-Ready Probe 1-Step (được thu được bằng cách thêm 3200x UltraScript® RTase vào 4x Lyo-Ready Probe Mix) nên được sử dụng ngay lập tức hoặc có thể được bảo quản tối đa 3 ngày ở 4 °C. Do đó, chúng tôi khuyên bạn chỉ nên chuẩn bị số lượng 4x Lyo-Ready Probe 1-Step Mix cần thiết và đưa các thành phần còn lại riêng biệt trở lại bảo quản ở nhiệt độ từ -30 °C đến -15 °C.
Có bình thường không nếu mức độ huỳnh quang của 4x Lyo-Ready Probe Mix khác với mức độ thu được từ các sản phẩm của đối thủ?
Các sản phẩm khác nhau có thể tạo ra mức độ huỳnh quang khác nhau. Tuy nhiên, điều này không ảnh hưởng đến độ chính xác của định lượng và các giá trị Ct sẽ không khác nhau giữa các sản phẩm.
Nồng độ MgCl2 trong 4x Lyo-Ready Probe Mix là gì?
4x Lyo-Ready Probe Mix chứa MgCl2 tại nồng độ 18 mM. Điều này có nghĩa là nồng độ cuối cùng trong phản ứng là 4.5 mM.
Tôi có thể sử dụng phương pháp mồi nào?
Các mồi cụ thể cho gen nên được sử dụng trong phản ứng 1 bước.
Tôi nên làm gì trong trường hợp gặp vấn đề với đông khô?
Trong hướng dẫn sản phẩm, chúng tôi cung cấp một giao thức đông khô chung, được thử nghiệm cho các ống thủy tinh 2 mL chứa 500 μL của Lyo-Ready Probe 1-Step Mix. Chúng tôi nhận thấy rằng đông khô được dễ dàng hơn (tức là, chương trình ngắn hơn, và bánh có bề ngoài đồng nhất hơn mà không có dấu hiệu co lại) khi hỗn hợp Lyo-Ready Probe 1-Step được pha loãng đến 1x hoặc 2x (với oligonucleotides và nước), vì vậy chúng tôi khuyên bạn thực hiện sự pha loãng này trước khi bắt đầu chạy.
Tùy thuộc vào thể tích đã đông khô, vật liệu của các ống (tức là, thủy tinh so với nhựa) và máy đông khô được sử dụng, chu trình có thể được tối ưu hóa.
Nếu các bánh không được hình thành đúng cách sau chu trình, chúng tôi khuyên bạn nên lặp lại với một chu trình bảo tồn hơn, trong đó quá trình làm khô chính được thực hiện ở -50 °C và thời gian được kéo dài để đảm bảo hình thành bánh đúng cách. Giai đoạn làm khô thứ cấp cũng có thể được kéo dài nếu cần thiết.
Những gì cần được xem xét khi thực hiện khuếch đại đa hợp với bộ Lyo-Ready Probe 1-Step?
Các mồi nên được thiết kế để đảm bảo chúng có nhiệt độ nối tương tự, đặc hiệu với mục tiêu và không tạo thành dimers mồi. Thời gian của giai đoạn phiên mã ngược có thể được kéo dài đến 10 phút để đảm bảo có đủ mẫu cho việc mồi và khuếch đại.
Khi thực hiện khuếch đại đa hợp, nồng độ khuyến nghị của mỗi mồi là gì?
Chúng tôi khuyên sử dụng 400-1000 nM cho mỗi mồi. Có một mức độ linh hoạt xung quanh nồng độ khuyến nghị này, tuy nhiên nồng độ mồi không nên được tăng quá phạm vi này vì điều này có thể ảnh hưởng đáng kể đến hoạt động của enzym. Thông thường nồng độ của dò là một nửa của các mồi khuếch đại, nhưng việc tối ưu hóa và xác nhận là cần thiết cho mỗi bộ mồi.
Xem thêm